加味补肝汤对糖尿病大鼠坐骨神经中蛋白激酶Cβ亚型表达的影响.docVIP

　　加味补肝汤对糖尿病大鼠坐骨神经中蛋白激酶Cβ亚型表达的影响 ：傅擎宇,黄娟,陈泽奇,熊丽丽 【摘要】 目的 观察加味补肝汤对糖尿病大鼠坐骨神经中蛋白激酶Cβ亚型(PKC-βⅡ)mRNA表达的影响,探讨其对实验性糖尿病大鼠周围神经病变的防治作用。方法 65只大鼠适应性喂养1周后,随机取20只为正常组,45只造模,以链脲佐菌素诱发糖尿病模型,将造模成功后的40只大鼠随机分为模型组、加味补肝汤组。分别于 治疗 后4、8周处死大鼠,用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术测定坐骨神经中PKC-βⅡ mRNA的表达。结果 治疗后4、8周模型组大鼠PKC-βⅡ mRNA表达明显高于正常对照组(P＜0.05),加味补肝汤组PKC-βⅡ mRNA表达明显低于同期模型组(P＜0.05)。结论 加味补肝汤对实验性糖尿病大鼠周围神经病变有一定的防治作用。 【关键词】 加味补肝汤；糖尿病；坐骨神经；蛋白激酶Cβ亚型；大鼠 Abstract：Objective To observe the effect of Jiaental diabetic rat and explore its preventive and therapeutic effects on peripheral neuropathy in experimental diabetic rats. Methods In 65 rats involved, 45 rats ade as model and 20 odel odel rats ly divided into model group and Jia the beginning of treatment respectively, and PKC-βⅡ mRNA of sciatic nerve erase chain reaction (RT-PCR). Results PKC-βⅡ expression of the model group on 4th or 8th al control group (P＜0.05), arkedly loodel group (P＜0.05). Conclusion Jiaental diabetic rats. 　　Key L,浸泡30 min,水煎40 min,第2次煎时加水200 mL,煎煮20 min,取煎汁,混匀,水浴浓缩成每1 mL含2.72 g原药材的药液。 　　1.3 仪器 TC-512型PCR仪(英国TECHNE公司)；血糖仪(德国罗氏公司ACCU-CHEK)；Motic2000图像分析仪；MS302多媒体生物信号记录分析系统(广州中医药大学)。 　　1.4 试剂 琼脂糖(北京鼎国公司)；溴化乙锭、链脲佐菌素(美国Sigma公司)；Trizol(MRC公司)；反转录(RT)试剂盒(美国MRI公司)；Pre Mix Taq(宝生物大连有限公司)；引物由上海生工生物技术有限公司合成；其他常规试剂由湘雅医院药剂科提供。 　 　2 实验方法 　　2.1 分组 65只大鼠适应性喂养1周后,随机取20只为正常组,45只造模,将造模成功后的40只大鼠随机分为模型组20只,加味补肝汤实验组20只。2组血糖值比较差异无统计学意义(P＞0.05)。 　　2.2 造模及给药 参照 文献 [3]方法。造模前禁食12 h,一次性腹腔注射1%链脲佐菌素(50 mg/kg,0.1 mol/L柠檬酸钠-柠檬酸缓冲液配制而成,pH4.2～4.5)诱发糖尿病,72 h后用血糖仪测定尾尖血血糖,凡血糖＞16.7 mmol/L为造模成功,造模不成功的大鼠按上述方法重复1次。正常组20只大鼠禁食12 h后一次性腹腔注射相等容积0.1 mol/L的柠檬酸钠-柠檬酸缓冲液。 　　2.3 血糖测定 尾静脉取血,采用葡萄糖氧化酶法,罗氏公司ACCU-CHEK血糖仪及试纸条测定。 　　2.4 神经电生理检测 参照文献[4]方法并略加改进,分别于治疗后4、8周末进行神经电生理检测。大鼠一次性腹腔注射10%水合氯醛(350 mg/kg),麻醉后俯卧固定,刺激电极置于坐骨切迹(刺激强度2.0 mV,刺激波宽3.0 ms),在踝部(远端)和右足二趾间分别插入记录电极, 参考 电极置于记录电极和刺激电极之间,并连接 计算 机MS302多媒体生物信号记录分析系统,记录远近端坐骨神经产生动作电位的潜伏期,测定两记录电极间的距离,神经传导速度为记录电极之间的距离/动作电位潜伏期之差。测定时保持被检测肢体温度在37 ℃左右。 ②组织总RNA提取：采用Trizol提取总RNA。按Trizol试剂说明书提取总RNA,溶解于20 μL DEPC处理灭菌双蒸水,经2%琼脂糖凝胶电泳检测RNA的完整性,并测定