地塞米松对胎鼠腭突中嵴上皮融合的影响.docVIP

　　地塞米松对胎鼠腭突中嵴上皮融合的影响 ：王浩宇 安峰 吴靖芳 任君旭 【摘要】 目的：研究地塞米松对胎鼠腭突中嵴上皮(Medial Edge Epithelium，MEE)细胞凋亡、增殖和分化的影响，以探讨地塞米松引起腭裂畸形的发病机制。方法：以醋酸地塞米松诱导胎鼠腭裂畸形，应用免疫组化法和图像分析研究MEE细胞中 bcl-2和p53基因在不同时期中实验组与对照组的表达情况。结果：实验组在GD13.5~16.5(GD，gestation day)MEE细胞的bcl-2 与p53表达总体维持增高趋势;GD13.5 MEE细胞的bcl-2 与p53表达实验组与对照组均无明显差别;GD14.5 MEE细胞的bcl-2与p5表达实验组明显多于对照组(Plt;0.01)。结论：地塞米松诱发腭裂出现MEE细胞凋亡减少，通过改变MEE细胞中bcl-2和p53基因的表达而实现对MEE细胞增殖与凋亡的调控是地塞米松引起腭裂可能机制之一。 【关键词】 bcl-2，p53;腭裂;腭突中嵴上皮;细胞凋亡 【ABSTRACT】Objective:To study the effectiveness and of dexamethasne(DEX)on the Apoptosis，differentiation and proliferation of mouse palatal medial edge epithelial(MEE)cells and its pathogenesis.Methods:The cleft palate of mice bryonic palatine process tissues of experimental group and that of control group ental group of gestation day(GD)13.5 to 16.5，the positive index of bcl-2 and p53 bee higher;On GD 13.5 the signal ental group and the control group;On GD 14.5 the signal ental group than that in control group.Conclusion:DEX can lead to remarkable cell apoptosis decrease in mouse palatal shelves，the expression of bcl-2 and p53 play an important role in regutating MEE cells apoptosis. 　　【KEY edial Edge Epithelium，Apoptosis 　　胚胎腭的发生发育是一系列连续、复杂的生物学过程，在这一系列复杂的过程中，细胞增殖与凋亡时刻发生并且关系紧密。细胞程序性死亡((programmed cell death，PCD)是保持机体细胞数目正常的一种内环境稳定机制，bcl- 2基因是目前公认的抗PCD基因，它广泛存在于哺乳动物胚胎组织中，而p53基因也是最近研究最透彻、功能最强大的一种抑癌基因。本研究采用免疫组化方法检测胚胎腭发育过程，比较腭突中嵴上皮(MEE)细胞bcl-2和p53基因表达变化，以及地塞米松对其表达的影响，探讨bcl-2和p53基因在地塞米松诱发胎鼠腭裂中的作用。 　 　1材料和方法 　　1.1动物健康成年未生育小鼠雌雄比例2∶1，体重为22～25g(北京大学医学部实验动物中心)。 　　1.2组织学标本的制备 　　地塞米松致腭裂动物模型的建立[1]，分别于孕期GD13.5，GD14.5，GD15.5和GD16.5(GD，gestation day)剖腹取胎，选取实验组腭裂胎头和对照组正常胎头，用Bouin液固定，石蜡包埋，连续切片(厚5μm)，将切片进行免疫组织化学染色。 　　1.3试剂 　　醋酸地塞米松注射液(华北制药集团)，兔bcl-2和p53多克隆抗体、即用型SABC免疫组化试剂盒、Tris-HCL缓冲液、0.01mol/L PBS液(武汉博士德生物工程有限公司)，DAB试剂(上海试剂一厂)等。 　　1.4免疫组化染色 　　常规脱蜡至水;抗原修复液修复约3min;0.01mol/L PBS液洗3min×3次;3%H2O2室温避光孵育15min;0.01mol/L PBS液洗3min×3次;5%BSA封闭。加入稀释(1∶100)的bcl-2或p53，湿盒中4℃孵育过夜。其他步骤按即用型SABC免疫组化试剂盒使用说明进行。盐酸-酒精分化、自来水蓝化、梯度酒精脱水、二甲苯透明、中性树胶封片。 　　1.5图像分析及统计学