微生物鉴定指导原则.pdfVIP

第三次公示稿 9204 微生物鉴定指导原则 本指导原则为非无菌产品微生物限度控制菌检查中疑似菌的鉴定，以及药物 原料、辅料、制药用水、中间体、终产品和环境中检出微生物的鉴定提供指导。 ， 当微生物的鉴定结果有争议时，以《伯杰氏系统细菌学手册》(《Bergeys Manual of Systematic Bacteriology》)现行版的鉴定结果为准。 微生物鉴定是指借助现有的分类系统，通过对未知微生物的特征测定，对其 进行细菌、酵母菌和霉菌大类的区分，或属、种及菌株水平确定的过程，它是药 品微生物检验中的重要环节，药典通则相应章节中对检出微生物的鉴定做了明确 规定，如“非无菌药品的微生物检查:控制菌检查”（通则 1106）中选择培养基 或指示培养基上发现的疑似菌落需进行鉴定； 对“无菌检查法”（通则 1101） 的阳性实验结果中分离的微生物进行鉴定，以判定试验是否重试；药品洁净实验 室微生物监测和控制指导原则（通则 9203）中建议对洁净室和其他受控环境分 离到的微生物进行鉴定，以掌握环境微生物污染情况，有助于污染调查。此外， 在药品生产中，有时亦需对药物原料、辅料、制药用水、生产环境、中间产物和 终产品中检出的微生物进行适当水平的鉴定。 微生物鉴定需达到的水平视情况而定，包括种、属鉴定和菌株分型。大多数 非无菌药品生产过程和部分无菌生产环境的风险评估中，对所检出微生物的常规 特征包括菌落形态学、细胞形态学(杆状、球状、细胞群、孢子形成模式等)、革 兰染色或其它染色法、及某些能够给出鉴定结论的关键生化反应(如氧化酶、过 氧化氢酶和凝固酶反应)进行分析，一般即可满足需要；非无菌产品的控制菌检 查一般应达到种属的水平；无菌试验结果阳性和无菌生产模拟工艺（如培养基 灌装）失败时，对检出的微生物鉴定至少达到种属水平，必要时需达到菌株水 平。 一、微生物的鉴定程序 微生物鉴定的基本程序包括分离纯化和鉴定，鉴定时，一般先将待检菌进行 初步的分类。鉴定的方法有表型微生物鉴定和基因型微生物鉴定，根据所需达到 的鉴定水平选择鉴定方法。微生物鉴定系统是基于不同的分析方法，其局限性与 方法和数据库的局限性息息相关，未知菌鉴定时通过与微生物鉴定系统中的标准 微生物（模式菌株）的特征(基因型和/或表型)相匹配来完成。如果数据库中没 1 第三次公示稿 有此模式菌株，就无法获得正确的鉴定结果。在日常的微生物鉴定试验中，用户 应明确所采用鉴定系统的局限性及所要达到的鉴定水平(属、种、菌株)，选用最 适合要求的鉴定技术，必要时采用多种鉴定方法确定。 1、待检菌的分离纯化 微生物鉴定的第一步是待检培养物的分离纯化，最常用的分离纯化方法是挑 取待检菌在适宜的固体培养基上连续划线分离纯化，以获取待检菌的纯培养物 （单个菌落）必要时可进一步进行纯培养，为表型鉴定和随后的鉴定程序提供足 够量菌体。从药物原材料、制药用水、及生产环境、中间产物和终产品的样品中 检出的受损微生物，经分离纯化程序使其由不利生存易产生变化的状态转变为在 营养富集和最佳培养温度条件下生存的稳定状态，以保证鉴定结果准确性。 2、初筛试验 常规的微生物鉴定，一般要先进行初筛试验确定待检菌的基本微生物特征， 将待检菌做初步分类。常见的初筛试验包括革兰染色、芽孢染色、镜检观察染色 结果和细胞形态、重要的生化反应等。 重要的生化筛选试验包括： 氧化酶试验用于区分不发酵的革兰阴性杆菌(氧化酶阳性)和肠道菌(氧化酶 阴性)。 过氧化氢酶试验用于区分葡萄球菌(过氧化氢酶阳性)和链球菌(过氧化氢酶 阴性)。 凝固酶试验用于区分凝固酶阴性葡萄球菌 (可推测为非致病性)和凝固酶阳 性葡萄球菌(很可能为致病性)。 初筛试验可为评估提供有价值的信息，对于微生物鉴定方法来说，初筛试验 是最关键的一步，若给出了错误的结果，将影响后续试验，包括微生物鉴定