新型骨替代材料.docVIP

　　新型骨替代材料 吴一民，陈建庭，金大地 【关键词】 骨替代材料 摘 要：［目的］研究珍珠层的生物相容性。［方法］在体外培养的第3代成骨细胞中分别加入珍珠层（实验组）、橡胶（对照组）的材料浸提液，观察细胞形态、细胞膜和超微结构的变化；通过BrdU核掺入法检测细胞增殖情况、通过MTT法检测成骨细胞代谢活性。［结果］实验组细胞形态及细胞结构良好、细胞膜完整；对照组中细胞形态发生改变，细胞膜及胞浆内细胞器均有破坏；BrdU及MTT检测结果显示珍珠层对人成骨细胞的增殖和代谢活性无阻滞作用。［结论］珍珠层具有良好的生物相容性，可作为骨替代材料应用于骨缺损修复。 关键词：骨替代材料； 珍珠层； 成骨细胞； 生物相容性 Abstract：［Objective］To study the biopatibility of nacre on cultured human osteoblasts in vitro［Method］The iliac bone of human an osteoblasts aterials:nacre,hydroxyapatite,and rubberThe appearance of osteoblast icroscopeMicrostructure of the osteoblast ission electron microscopeAdditionally,to determine aterials affect cell proliferation,the numbers of BrdUlabeled cells ined at three groupsMTT assay an osteoblasts［Result］Under the phase contrast microscope,the appearance of the osteoblasts in ticroscopy shober of mitochondrion and rough endoplasmic reticulum in tbers of BrdUlabeled cells revealed that females produced more cells than males in the dentate gyrus but not in the subventricular zone［Conclusion］The nacre have no harmful effect to character of biology of human osteoblasts in vitro Key aterial; Nacre; Osteoblast; Biopatibility 珍珠层是海洋生物珍珠贝科动物珠母贝的贝壳内层，通过生物的自我矿化而形成。近年来，国外学者的研究证实珍珠层是一种具有广阔的科研价值和临床应用前景的骨替代材料〔1〕。国内在这方面的研究多为基于中医理论的描述，观察珍珠层粉的生肌、收敛等作用，将珍珠层作为骨替代材料的研究未见报道。本实验采用作者自行研制的珍珠层材料，研究该材料的生物相容性，为其临床应用提供依据。 1 材料与方法 11 材 料 珍珠层：将马氏珠母贝（中科院南海海洋研究所提供）在去离子水中浸泡48 h后，机械磨除其外层，蒸气熏蒸4 h后真空干燥，制成粉剂。丁睛橡胶粉末:市售。 12 材料浸提液 将珍珠层、天然橡胶分别与09％生理盐水按比例（02 g／ml）在37 ℃下浸提12 h制成浸提液，消毒备用。 13 人成骨细胞分离培养和鉴定〔2〕 14 实验分组 实验分为：A珍珠层组（试验组）、B橡胶组（对照组），每组包括加盖玻片24孔培养板2块，100 ml培养瓶1只，96孔培养板4块。将第3代成骨细胞分别接种于两组细胞培养板及培养瓶中，细胞密度为2×105个／ml，加足培养液后密闭培养。次日在倒置相差显微镜下观察细胞已贴壁后,倒出原培养液，按1∶1的比例加入培养液和材料浸提液，密闭培养并作各种指标的测定。 15 检测项目及方法 151 细胞形态观察 通过Olympus倒置显微镜动态观察体外培养的人成骨细胞加入两种材料浸提液后细胞形态及生长情况的变化。 152 细胞超微结构观察 通过透射电镜观察试验组与对照组细胞超微结构的变化。培养48 h后，用细胞刮器将成骨细胞由培养瓶中刮下，离心后，加入2％戊二醛固定24 h，PBS充分漂洗，1％四氧化锇后固定15 h，梯度丙酮脱水（50％、70％、90％、100％3次，每次15 min），环氧树脂浸透包埋，超薄切片机进行自动半薄切片，铀-铅染色，EM1200EX型透射电子显微镜观察。 153 细胞膜完整性测定 采用AOEB混合染色