槐花米中芦丁的提取精制和鉴定最终版 1.docVIP

实验 槐花米中芦丁的提取、精制和鉴定 芦丁（Rutin）亦称芸香苷（Rutinoside），在植物界广泛存在，其中以槐米、荞麦叶、蒲公英和烟叶中 含量较多，可作为提取芦丁的原料。 槐花米系豆科植物Sophora japonica 的未开放花蕾，具有调节毛细血管渗透性之作用，临床用作毛细血管止血药，如复方芦丁，也作为高血压的辅助治疗药物。除此之外，还可作为制药原料，用于制造槲皮素（Quercetin）、羧乙基槲皮素、羧乙基芦丁、二羧丙基芦丁、β-乙基吗啡芦丁、6-而乙基氨基芦丁等。 槐花米中芦丁的含量高达12%~16%,另含少量皂苷。芦丁水解后得到槲皮素，皂苷水解后可得到白桦酯醇（Betulin）及槐花二醇（Sophoradiol）。 芦丁为淡黄色细小针状结晶，含三个结晶水，熔点177~178℃。；芦丁溶于热水（1:200），难容于冷水（1:8000）；溶于热甲醇（1:7），冷甲醇（1:100）；热乙醇（1:30），冷乙醇（1:300），难溶于乙酸乙酯、丙酮，不溶于苯、三氯甲烷、乙醚及石油醚等溶剂。易溶于碱液中呈黄色，酸化后又析出。 槲皮素即芸香苷苷元，为黄色结晶，熔点为313~314℃。槲皮素溶于热乙醇（1:23），冷乙醇（1:300）。可溶于冰醋酸、乙酸乙酯、丙酮等溶剂，不溶于石油醚、苯、乙醚、三氯甲烷和水中。 芦丁和槲皮素的结构如下： 实验目的 1、通过芦丁的提取与精制，掌握碱溶酸沉法提取黄酮类化合物的原理及操作。 2、通过芦丁结构的鉴定，了解苷类结构研究的一般程序和方法。 3、通过UV、IR、HNMR和 MS图谱解析，了解光谱法在黄酮类化合物结构鉴定中的作用。 二、实验内容 （1）芦丁的提取 （2）芦丁的精制 （3）芦丁的水解 芦丁、槲皮素及糖的鉴定 三、实验时间 步骤 所需时间/min 芦丁的提取 40 芦丁的精制 60 芦丁的水解 50 芦丁、槲皮素及糖的鉴定 120 四、实验原理 黄酮苷类化合物，虽然它有一定的极性，但却难溶于酸性水，易溶于碱性水，故可用碱性水提取，再将碱水提取液调至酸性，黄酮苷即可沉淀析出。此法简便易行，如芦丁的提取就是应用了这种方法。由于芦丁结构中含有酚羟基，能与碱成盐而溶于水中，向该碱性溶液中加入酸调pH至4—5，则芦丁游离析出。在提取过程中，为了避免芦丁被氧化变质(在碱性条件下更容易被氧化分解)，常加入焦亚硫酸钠起抗氧化作用，加入硼砂起保护邻二酚羟基不被氧化破坏的作用。 芦丁的精制是利用它可溶于热水，难溶于冷水的性质进行的。也可以用乙醇作溶剂，根据芦丁在冷热乙醇中的溶解度不同进行提取。 工艺流程 五、实验材料与设备 1、实验设备与仪器 烧瓶，温度计，布氏漏斗，抽滤瓶，循环水式真空泵，单口恒温水浴箱，电动搅拌器，提勒管（b形管）,酒精灯，毛细管，试管，量筒，烧杯，电热真空干燥箱，电热套，冷凝管，紫外灯，熔点仪。 2、实验材料与试剂 槐花米，硼砂，焦亚硫酸钠，氧化钙，无水乙醇，甲醇，硫酸，盐酸，氢氧化钡，三氯化铝，正丁醇，醋酸，氨水，精确PH试纸。 标准品:芦丁，槲皮素，葡萄糖，鼠李糖。 3、实验前准备 苯胺-邻苯二甲酸的配置：将1.66邻苯二甲酸和0.93g的苯胺溶于100ml水饱和的正丁醇中。 实验步骤 1芦丁的提取 ①将40g槐花米，800mL澄清石灰水，0．6g硼砂，1．2g焦亚硫酸钠一起置于1000mL的圆底烧瓶中，在恒温水浴锅中65~C搅拌提取55min，注意添加蒸馏水及烧瓶中颜色的变化(深棕黄色)，趁热抽滤。 ②滤下的槐花米再次加入600mL澄清石灰水，0．45g硼砂，0．9g焦亚硫酸钠于 74 65℃下搅拌提取约50min，趁热抽滤。 ③合并二次滤液，用浓HCl将pH值调整至l。 ④静置过夜出现黄色絮状沉淀。 芸香苷的精制 ①将沉淀抽滤分离后加入80mLpH为2—2．5的盐酸溶液，分散成糊状，搅拌10min，放置30min以上。 ②糊状物分层后，抽滤得浅黄色沉淀物。 ③用蒸馏水洗涤沉淀物至洗涤液pH值接近7。 ④将沉淀物放置空气中自然干燥或于65℃真空干燥得芦丁。 ⑤称重、测熔点。 芦丁的水解 取芦丁1g，研碎后置于250mL圆底烧瓶中，加入2％硫酸溶液80mL，小火加热微沸回流约60min。开始加热10min为澄清溶液，逐渐析出黄色针状结晶，即槲皮素，抽滤取结晶，保留滤液20mL，以检查其中所含单糖。用少量水洗涤沉淀，