松花粉对砷中毒小白鼠肝脏RNA含量及其尿酸含量的影响.docVIP

　　松花粉对砷中毒小白鼠肝脏RNA含量及其尿酸含量的影响 ：韦利英，罗艳红，罗凤芬，吴妮，王强，梁通，黄秀敏 【摘要】 　　目的 通过研究松花粉对砷中毒小鼠核糖核酸(RNA)及其尿酸含量的影响来观察松花粉对砷中毒小白鼠的 治疗 作用。方法 将39只小鼠随机分为三组：A组为正常对照组，B组为治疗组，C组为中毒组。正常对照组饮用蒸馏水；治疗组、中毒组均隔天注射NaAsO2(1mg/kg)进行砷染毒，治疗组在砷染毒进行的第15天后开始用松花粉灌胃(1g/kg)。至第45天，分别测各组小白鼠肝脏RNA及其尿酸的含量。结果 中毒组与正常组相比，小白鼠肝脏RNA含量和尿酸含量显著增高（Plt;0.01）；治疗组与中毒组相比，小白鼠肝脏RNA含量和尿酸含量显著降低(Plt;0.01)；正常组与治疗组小白鼠肝脏RNA含量和尿酸含量差异无显著性（Pgt;0.05）。结论 松花粉能使砷中毒小白鼠肝脏RNA及尿酸的含量降低并恢复正常，为松花粉在治疗肿瘤方面有更深的研究提供 参考 。 【关键词】 松花粉 砷中毒 小鼠 RNA 尿酸 　　在正常情况下，细胞的增殖受到多种因素的调控，调控失衡可能引起异常的增殖和持续的分裂。肿瘤的发生是由于细胞的增殖与分化失常所导致的恶性生长现象。而我们知道砷中毒可以导致肿瘤的发生，因此，对砷中毒小白鼠肝肿瘤或异常增生的诊断和预后具有重要的意义。核糖核酸(RNA)在生命活动中具有重要的作用，它和蛋白质共同负责基因的表达和表达过程的调控。它的变化对肿瘤生物学行为有直接的影响［1］。RNA的含量可作为肝肿瘤诊断及判断预后的理想指标［2］，另外，它也可以作为肿瘤恶变的指标之一［3］。松花粉的排砷、保护机体方面的作用已有研究［4，5］，RNA主要在肝脏合成，通过肾脏排泄，本实验通过测定肝脏RNA和尿酸的含量来检测松花粉对砷中毒小鼠的治疗作用。 　　本次实验采用紫外分光光度法，从肝脏RNA水平上定量分析正常组、砷中毒组以及松花粉治疗组小白鼠的肝细胞增殖情况，以肝脏RNA的含量为指标，同时测定尿酸含量，通过对肝脏RNA含量及尿酸含量的变化来分析RNA的合成及排泄情况，为松花粉在治疗肿瘤方面有更深的研究提供参考。 　　 1 材料与方法 　　1.1 试剂 NaAsO2，分析纯，购自上海试剂总厂第四分厂；10%NaCl溶液，0.1mol/L NaOH溶液，95%乙醇，10%乙酸。 　　1.2 药品 国珍松花粉，购自 中国 新时代公司。 　　1.3 仪器 紫外分光光度计，生化全自动分析仪。 　　1.4 动物分组 昆明小鼠39只（购自广西医科大学试验动物部），雌性，均为12周龄，体重20g左右，普通（清洁）级。将小白鼠随机分为三组，每组13只。 　　1.5 染毒与治疗 正常对照组，自行饮用蒸馏水；治疗组、中毒组，用亚砷酸钠染毒，1mg/kg体重隔天腹腔注射。15天后，治疗组的小鼠用国珍松花粉液，浓度为0.09g/ml，0.6ml/只，持续灌胃治疗，至第30天处理各组动物。 　　1.6 采样和检测方法 尿酸的测定方法采用生化全自动分析仪。 　　1.6.1 肝匀浆制备 剖腹取新鲜鼠肝，用0.9％NaCl洗去血液，除去结缔组织，剪碎，称取1g肝组织，加1m1 0.14mol/L NaCl溶液，研钵中研磨，制成肝匀浆。 　　1.6.2 分离核蛋白 肝匀浆倒入试管中，4000r/min离心5min，上清倒入另一试管中为A管。沉淀加0.25ml 0.14mol/L NaCl搅匀后再置研钵中研磨，4000r/min离心5min，上清倒入A管，沉淀重复上述操作，上清并入A管，沉淀弃去。 　　1.6.3 纯化核蛋白 A管用10％乙酸调pH至4.2，混匀，静置5min，4000r/min离心5min，倾去上清，沉淀含核糖核蛋白。 　　1.6.4 溶解核糖核蛋白 A管沉淀中加0.75m1 10％NaCl，搅匀，100℃水浴10min(不断搅拌，防沸溢出)，冷却，4000r/min离心5min，留上清液。 　　1.6.5 纯化RNA A管上清液加95％冷乙醇5m1，见乳白色核糖核酸钠沉淀，混匀放置10min，4000r/min离心15min，沉淀为纯化RNA。 　　1.6.6 RNA的溶解 沉淀中加入0.1mol/L NaOH 1.0ml，搅拌溶解，2000r/min离心10min，上清液则为RNA水解液。 　　1.6.7 RNA的测定 用4ml 0.1mol/L NaOH 将样品稀释到一定浓度，以0.1mol/L NaOH调零，测定样品的A260， 计算 出1g肝组织中的RNA含量。 　 　3 讨论 　　砷中毒后T淋巴细胞的rDNA转录活性降低，机体肿瘤免疫力下降［5］。同时砷还可引起正常细胞的增殖调控失衡，细胞异常增殖，组织发生瘤变［4］。