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细胞工程yyd第九章 植物细胞工程
第九章 植物细胞工程
第一节 植物脱毒技术
一、脱毒的目的
1、防止品种的退化,保证作物的品质和产量。
用无毒株取代病毒株,产量最多可增加300%,平均30%
2、促进国际间植物交流
二、脱毒的原理与方法
1、热处理法:在高于正常的温度下,植物组织中的病毒可被部分或完全钝化,但很少伤害甚至不伤
害寄主组织。可以在专门的热疗室中用热水或热蒸汽处理。
缺点:不是所有病毒都对热处理敏感,而且病毒可能恢复活性。
香石竹在38-40℃条件下经两个月处理可除去全部病毒
菊花在35-38℃的条件下处理60天可使病毒失活
马铃薯在37℃条件下处理10-20天能除去卷叶病毒
柑橘:速衰和黄化病毒40/30℃处理7—12周
鳞皮病毒要在40/30℃处理8周
啐叶病毒需要在50℃处理3—22 小时
青果病毒需要在50℃条件下处理30-40 分钟
2、茎尖培养消除病毒:
1)原理:病毒在植物体内分布不均
1934 年,White 通过观察烟草根系,首先发现病毒在根系的不同区域分布是不均匀的,越靠近根尖区
病毒含量越低,在根尖的分生组织区(生长点)的顶端不含病毒
1949 年,Limasset 根据他的发现提出,在芽的分生组织区也存在同样的情况
1952 年Morel 和Martin 首先利用茎尖分生组织培养获得了马铃薯无毒苗,同时建立了茎尖脱毒的组
织培养技术体系。
分生组织病毒少的原因:
①病毒易通过维管系统而移动,但分生组织不存在维管,所以只能通过胞间连丝起作用,但速度慢,
赶不上茎尖增生的速度
②病毒的代谢要从细胞处获得能量,在代谢活性高的细胞中,细胞需要能量多,所以病毒不易进行生
存
③在茎尖中存在高水平内源生长素,可以抑制病毒的增殖
2)方法:就是在无菌操作台上小心剥出茎尖,在适当的培养基培养,使之生成一个新的无毒个体
尽管茎尖培养法是非常常用的方法,但病毒也能侵染该区,所以,常采用热处理法+茎尖培养法,这样
更有效。
影响脱毒效果的因素:
1、母体材料病毒侵染的程度
2、起始培养茎尖的大小
3、通过愈伤组织培养脱毒
愈伤组织原指植物在受伤以后于伤口表面形成的一团薄壁细胞,在组织培养中,则指在人工培养基上由外
植体长出来的一团无序生长的薄壁细胞。
受病毒感染的组织形成的愈伤组织中,并非都带有病毒,所以可以通过切下一小块愈伤组织培养成完
整的植株。
愈伤组织不一定含有病毒的原因:
(1)病毒复制速度赶不上细胞增殖速度
(2)有些细胞突变获得抗病毒的额外能力
愈伤组织培养脱毒的缺点:愈伤组织细胞在遗传上不稳定
三、脱毒效果的检验:
在利用其作为无病毒母株之前,必须对之进行若干次检验
一般很简单就是检验叶和茎是否有该病毒特有的可见特征。
但很多可见症状却是要经过相当长的时间,才能在寄主中表现出来所以需要敏感的方法,所以必须采
取特定的方法进行检测。
1、汁液感染法(敏感植物法)
①取下待检测的植株的叶片,置于等体积的 0.1MNa3PO4 中,研碎。
②在敏感植物的上,撒上少许金刚砂,将汁液轻轻浮于敏感植物叶片上,适当用力摩擦,使之叶面细胞
受到侵染而不损伤叶片。
③5min 后,洗去残余汁液,一般 6-8天就可以观察到现象。
2、电镜观察法
3、免疫学方法(如Elasa 法)
四、脱毒原种的保存:
脱毒株并不具有额外的抗性,很快就可以被重新感染,所以我们要选用合适的方法保存备用。
1、冷冻保存:一般是将茎尖于液氮中保存,使之完全停滞,在完全不活动的状态
2、低温保存:在低温下(1-9)保存,老化过程减慢,不会象冷冻保存那样完全停止,但需要一定时间
继代一次,一般为一年。
第二节 植物快繁技术
一、快繁的概念
植物快繁技术:是利用组织培养方法将植物体某一部分的组织小块,进行培养并诱导分化成大量的小植株,
从而达到快速无性繁殖的目的。跟常规的繁殖方法相比它还是一种微型操作系统,所以也称之为微繁。
自Morel 于1960 年首先建立了兰花离体繁殖的方法后,目前已有400 种植物的离体繁殖获得成功,
其中包含许多具有重要经济价值的花卉,水果,作物等,已经取得了重大的经济效益与社会效应。
二、快繁的意义:
1、能够有效地保持优良品种的优良特性;
离体繁殖体系建立在体细胞系的基础上,整个过程处于人为控制条件下,所以可以保证不会发生品种
的退化
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