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细胞工程yyd第九章 植物细胞工程

第九章 植物细胞工程 第一节 植物脱毒技术 一、脱毒的目的 1、防止品种的退化,保证作物的品质和产量。 用无毒株取代病毒株,产量最多可增加300%,平均30% 2、促进国际间植物交流 二、脱毒的原理与方法 1、热处理法:在高于正常的温度下,植物组织中的病毒可被部分或完全钝化,但很少伤害甚至不伤 害寄主组织。可以在专门的热疗室中用热水或热蒸汽处理。 缺点:不是所有病毒都对热处理敏感,而且病毒可能恢复活性。 香石竹在38-40℃条件下经两个月处理可除去全部病毒 菊花在35-38℃的条件下处理60天可使病毒失活 马铃薯在37℃条件下处理10-20天能除去卷叶病毒 柑橘:速衰和黄化病毒40/30℃处理7—12周 鳞皮病毒要在40/30℃处理8周 啐叶病毒需要在50℃处理3—22 小时 青果病毒需要在50℃条件下处理30-40 分钟 2、茎尖培养消除病毒: 1)原理:病毒在植物体内分布不均 1934 年,White 通过观察烟草根系,首先发现病毒在根系的不同区域分布是不均匀的,越靠近根尖区 病毒含量越低,在根尖的分生组织区(生长点)的顶端不含病毒 1949 年,Limasset 根据他的发现提出,在芽的分生组织区也存在同样的情况 1952 年Morel 和Martin 首先利用茎尖分生组织培养获得了马铃薯无毒苗,同时建立了茎尖脱毒的组 织培养技术体系。 分生组织病毒少的原因: ①病毒易通过维管系统而移动,但分生组织不存在维管,所以只能通过胞间连丝起作用,但速度慢, 赶不上茎尖增生的速度 ②病毒的代谢要从细胞处获得能量,在代谢活性高的细胞中,细胞需要能量多,所以病毒不易进行生 存 ③在茎尖中存在高水平内源生长素,可以抑制病毒的增殖 2)方法:就是在无菌操作台上小心剥出茎尖,在适当的培养基培养,使之生成一个新的无毒个体 尽管茎尖培养法是非常常用的方法,但病毒也能侵染该区,所以,常采用热处理法+茎尖培养法,这样 更有效。 影响脱毒效果的因素: 1、母体材料病毒侵染的程度 2、起始培养茎尖的大小 3、通过愈伤组织培养脱毒 愈伤组织原指植物在受伤以后于伤口表面形成的一团薄壁细胞,在组织培养中,则指在人工培养基上由外 植体长出来的一团无序生长的薄壁细胞。 受病毒感染的组织形成的愈伤组织中,并非都带有病毒,所以可以通过切下一小块愈伤组织培养成完 整的植株。 愈伤组织不一定含有病毒的原因: (1)病毒复制速度赶不上细胞增殖速度 (2)有些细胞突变获得抗病毒的额外能力 愈伤组织培养脱毒的缺点:愈伤组织细胞在遗传上不稳定 三、脱毒效果的检验: 在利用其作为无病毒母株之前,必须对之进行若干次检验 一般很简单就是检验叶和茎是否有该病毒特有的可见特征。 但很多可见症状却是要经过相当长的时间,才能在寄主中表现出来所以需要敏感的方法,所以必须采 取特定的方法进行检测。 1、汁液感染法(敏感植物法) ①取下待检测的植株的叶片,置于等体积的 0.1MNa3PO4 中,研碎。 ②在敏感植物的上,撒上少许金刚砂,将汁液轻轻浮于敏感植物叶片上,适当用力摩擦,使之叶面细胞 受到侵染而不损伤叶片。 ③5min 后,洗去残余汁液,一般 6-8天就可以观察到现象。 2、电镜观察法 3、免疫学方法(如Elasa 法) 四、脱毒原种的保存: 脱毒株并不具有额外的抗性,很快就可以被重新感染,所以我们要选用合适的方法保存备用。 1、冷冻保存:一般是将茎尖于液氮中保存,使之完全停滞,在完全不活动的状态 2、低温保存:在低温下(1-9)保存,老化过程减慢,不会象冷冻保存那样完全停止,但需要一定时间 继代一次,一般为一年。 第二节 植物快繁技术 一、快繁的概念 植物快繁技术:是利用组织培养方法将植物体某一部分的组织小块,进行培养并诱导分化成大量的小植株, 从而达到快速无性繁殖的目的。跟常规的繁殖方法相比它还是一种微型操作系统,所以也称之为微繁。 自Morel 于1960 年首先建立了兰花离体繁殖的方法后,目前已有400 种植物的离体繁殖获得成功, 其中包含许多具有重要经济价值的花卉,水果,作物等,已经取得了重大的经济效益与社会效应。 二、快繁的意义: 1、能够有效地保持优良品种的优良特性; 离体繁殖体系建立在体细胞系的基础上,整个过程处于人为控制条件下,所以可以保证不会发生品种 的退化

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