电磁脉冲对小鼠脾细胞Fas和FasLmRNA表达的影响.docVIP

　　电磁脉冲对小鼠脾细胞Fas和FasL mRNA表达的影响 摘 要:目的 观察电磁脉冲对小鼠脾细胞Fas和FasL mRNA表达的影响. 方法 40只体质量（18±2）g的健康雄性BALB/c小鼠随机分为未照射组（8只）和全身照射组（32只）.小鼠连续2d接受每日25次脉冲的电磁脉冲全身照射，每次照射间隔约2min.于照射后2，4，8和12h分别取2只未照射小鼠和8只照射小鼠的脾脏.采用RNA打点杂交法检测小鼠脾细胞Fas和FasL RNA的表达水平，并对杂交信号进行灰度扫描后计算RNA表达指数. 结果 受电磁脉冲照射后2h，小鼠脾细胞Fas和FasL的RNA表达指数即分别从未照射的0.59±0.26和0.56±0.23升高到0.97±0.25和0.96±0.21，4h又下降至0.75±0.24和0.69±0.22，8h再度上升达最高峰1.22±0.22和1.32±0.50（与对照组相比Plt;0.001），于12h时下降至接近正常水平. 结论 电磁脉冲辐照可引起小鼠脾细胞Fas和FasL RNA表达水平波动性升高. 　　Keyagic pulse;Fas;FasL;nucleic acid hybridization 　　Abstract:AIM To observe the effects of electromagic pulse on mRNA expression of Fas and FasL in murine splenocytes.METHODS Forty male Balb/c mice ass of（18±2）g ly designated non-irradiation group（8mice）and ice）.Mice received irradiation of electromagic pulse for tinutes interval.Tice and8irradiated mice oved2hours，4hours，8hours and12hours after irradiation，respectively.RNA dot blotting assay ployed to examine the expression levels of Fas and FasL gene in murine splenocytes.Positive signals urine splenocytes in-creased markedly2h after EMP irradiation，0.97±0.25vs0.59±0.26for Fas and0.96±0.21vs0.56±0.23for FasL.Hoal level.CONCLUSION EMP irradiation can cause an undulatory increasing expression of Fas and FasL in murine splenocytes. 　　0 引言 　　电磁脉冲（electromagic pulse，EMP）源于核爆炸的电磁波，它对电子仪器的破坏作用已为世人所公认，但对其生物学效应尚知之甚少.我们发现，EMP辐照可致离体培养的小鼠脾细胞发生凋亡.Fas及其配体FasL为介导细胞凋亡的一对膜蛋白，FasL与Fas结合可导致表达Fas的细胞发生凋亡.研究表明，Fas-FasL相互作用是机体清除活化T淋巴细胞，维持免疫自稳的重要机制［1］ .为进一步探讨EMP对哺乳动物免疫系统的效应，我们借助核电磁脉冲有界波模拟器照射小鼠的模型，采用RNA打点杂交法观察EMP辐照对小鼠脾细胞Fas和FasL mRNA表达的影响. 　　1 材料和方法 　　1.1 材料 　　电磁脉冲有界波模拟器;Trizol（Gibco公司），DEPC和T4多核苷酸激酶（Sigma公司），［γ-32 P］ATP（北京亚辉公司），寡核苷酸合成于上海生物工程公司.健康雄性BALB/c小鼠，体质量（18±2）g，本校实验动物中心提供. 　　1.2 方法 　　40只小鼠随机分为未照射组（8只）和全身照射组（32只）.采用电磁脉冲有界波模拟器对小鼠进行照射，照射参数:自由体位，脉冲半宽340ns，前沿24ns，场强为40kV#12539;m -1 的EMP每日25次脉冲全身照射，每次照射间隔约2min，连续照射2d.照射后2，4，8和12h分别取8只照射小鼠和2只未照射小鼠的脾脏，立即冻存于液氮中.小鼠脾细胞总RNA的提取按文献［2］及Trizol说明书进行.探针标记参照文献［3］进行，小鼠寡核苷酸探针Fas（5′GGAGAATCGCAGTAGAAGTCTGGTTTGCAC 3′），FasL（5′