2株白腐真菌产漆酶条件的优化.PDF

— ３２２— 江苏农业科学　２０１３年第４１卷第７期 张　力，韦丽敏，张君胜，等．２株白腐真菌产漆酶条件的优化［Ｊ］．江苏农业科学，２０１３，４１（７）：３２２－３２４． ２株白腐真菌产漆酶条件的优化 １ ２ １ １ ２ 张　力 ，韦丽敏 ，张君胜 ，杨晓志 ，何桂霞 （１．江苏畜牧兽医职业技术学院，江苏泰州２２５３００；２．甘肃农业大学动物科学技术学院，甘肃兰州７３００７０） 　　摘要：采用液体摇瓶培养方法，探讨了碳源、氮源、ｐＨ值、培养温度等各种因素对白腐真菌分泌漆酶能力的影响， 采用单因素和正交试验对主要的影响因素进行了优化。研究得出菌株的最佳产漆酶培养基为：２００ｇ／Ｌ马铃薯 ＋ ２０ｇ／Ｌ葡萄糖＋５ｇ／Ｌ酵母膏 ＋１．５ｇ／ＬＭｇＳＯ ＋０．１ｇ／Ｌ维生素Ｂ ＋０．０５ｇ／ＬＺｎＳＯ ＋０．０５ｇ／ＬＭｎＳＯ ＋３．０ｇ／Ｌ ４ １ ４ ４ ＫＨＰＯ。优化后的培养基最适发酵条件为：起始ｐＨ值６，转速１３０ｒ／ｍｉｎ，装液量７０ｍＬ，在３２℃条件下摇床培养发 ２ ４ 酵１０ｄ左右时，粗酶液的酶活力达到１２．７Ｕ／ｇ。 　　关键词：白腐真菌；漆酶；培养条件；酶活力 　　中图分类号：ＴＳ２０１．３　　文献标志码：Ａ　　文章编号：１００２－１３０２（２０１３）０７－０３２２－０３ 　　木质素生物降解的突破研究始于２０世纪 ８０年代初， ＭｎＳＯ ＋３．０ｇ／ＬＫＨＰＯ ＋２０ｇ／Ｌ琼脂）；液体培养基（综合 ４ ２ ４ Ｋｉｒｋ和Ｇｏｌｄ领导的２个小组分别从白腐菌模式菌种———黄 马铃薯固体培养基中去除琼脂）。 孢原毛平革菌（Ｐｈａｎｅｒｏｃｈａｅｔｅｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ）中发现了木质素 １．２　试验方法 过氧化物酶、锰过氧化物酶，在后期又发现了漆酶，这３种酶 １．２．１　扩大培养　在综合马铃薯固体培养基上接种白腐真 ［１－２］ 菌，２８℃恒温培养。 共同构成了白腐菌的木质素降解酶系 。不同白腐菌木质 素降解酶系的组成大不相同，而且不同比例的降解酶系成分 １．２．２　液体产酶培养　在２５０ｍＬ三角瓶中装入７０ｍＬ液体 将会直接影响木质素的降解效果，因此木质素降解酶系的研 培养基，接入 ４片培养 ９ｄ的平板菌种（直径 ８ｍｍ）， 究与木质素降解的研究密切相关。 １２０ｒ／ｍｉｎ、２８℃条件下摇床培养。 漆酶是一类多酚氧化酶，多数白腐真菌都能分泌漆 １．２．３　粗酶液的制备　在液体培养至第９天时，用６层纱布 ［３］ 过滤培养液，４０００ｒ／ｍｉｎ条件下离心，上清即为粗酶液。 酶 。很多研究表明，漆酶产生于白腐菌的次生代谢阶段， ［４］ １．２．４　酶活测定　将 ０．５ｍＬ３．３６ｍｍｏｌ／Ｌ邻联甲苯胺、 是木质素降解过程中的关键酶 ，当营养物条件（如碳、氮 ［５］ ３．４ｍＬ０．１ｍｏｌ／Ｌ醋酸缓冲溶液（ｐＨ值４．６）、０．１ｍＬ酶液混 源）受到限制时，漆酶进行合成并分泌到细胞外 。由于白 腐菌种类多样、参与降解活动的酶种类不一致、降解底物不同 合后于２８℃反应１０ｍｉｎ，用ＴＵ－１８１０型紫外可见分光光度 等原因，使得不同白腐菌种类的降解发生条件表现出一定程 计测定 ６００ｎｍ下的吸光度。酶活力用吸光度的增值 ［７］ 度的区别，因而要根据试验菌株自身的特