血管紧张素(17)对转化生长因子β1诱导的大鼠肾小球系膜细胞增殖的影响.docVIP

　　血管紧张素(17)对转化生长因子β1诱导的大鼠肾小球系膜细胞增殖的影响 ：贺红焰 何进, 李隽, 王明勇, 刘建 【摘要】 目的: 研究血管紧张素(17)［Ang(17)］对转化生长因子β1(TGFβ1)诱导的大鼠肾小球系膜细胞（GMC）增殖的影响并初步探讨其机制。方法: 采用C增殖（Plt;0.05）; 同时, Ang(17)对TGFβ1诱导的系膜细胞内Smad3, Smad7基因mRNA表达有明显的抑制作用（Plt;0.05）。结论: Ang(17)对TGFβ1诱导的系膜细胞增殖有抑制作用, 其机制可能是通过下调细胞内信号传递分子Smad3/7的表达。 【关键词】 系膜细胞; 血管紧张素(17); 转化生长因子β1; 细胞增殖; Smad3/7 转化生长因子β1(transforming groatrix, ECM)合成和分泌、 改变基质降解酶及其抑制因子的表达量和活性等。肾小球系膜细胞(GMC)是肾小球内一种固有的血管外周细胞, 大量实验研究证实, 该细胞的异常增殖在肾小球病变进展过程中起着重要的作用, 而TGFβ1对GMC具有明显的促增殖作用。血管紧张素(17) ［Angiotensin（17）, Ang(17)］是肾素血管紧张素家族中被新认识的一个重要成员, 国内外大量的实验以及我们既往的研究均证实Ang(17)可抑制AngⅡ、 内皮素1等多种因素引起的包括GMC在内的多种细胞增殖以及ECM的分泌［1, 2］, 但它对TGFβ1所诱导的GMC增殖的影响尚无相关报道。我们研究Ang(17)对TGFβ1诱导的大鼠系膜细胞增殖及其对细胞内信号传递分子Smad3/7的影响, 旨在探讨Ang(17)对肾脏纤维化的影响及可能的作用机制, 为慢性肾脏疾病的防治提供新的思路和理论依据。 1 材料和方法 1.1 材料 大鼠肾小球系膜细胞购自武汉大学保藏中心; Ang(17)、 TGFβ1均购自美国Sigma公司; C的培养 复苏细胞后将其加入RPMI1640培养液, 接种于培养瓶中, 放入培养箱中。至细胞长至亚融合状态．用2.5 g/L胰酶消化, 传代, 取生长旺盛的细胞做实验。 1.2.2 I1640培养液制成（5～10）×107/L的细胞悬液, 接种在96孔板中, 每孔加入细胞悬液100 μL, 无血清培养24 h, 使其生长同步化, 当细胞生长融合至70%左右时加入干预因素, 药物干预24 h后, 每孔加入C总RNA, 逆转录为cDNA后进行PCR反应。扩增大鼠Smad3的引物序列为: 上游引物: 5′ACA GCA TGG ACG CAG GTT CT3′, 下游引物: 5′TCA CTG AGG CAC TCC GCA AA3′, 扩增片段长337 bp; 扩增大鼠Smad7的引物序列为: Smad7上游引物: 5′GGA GTC CTT TCC TCT CTC3′, 下游引物: 5′GGC TCA ATG AGC ATG CTT CAC3′, 扩增片段长125 bp, 扩增大鼠βactin 上游引物: 5′CCT TCC TGG GCA TGG AGT CCT G3′, 下游引物: 5′GGA GCA ATG ATC TTC ATC TTC3′, 扩增片段长205 bp）, PCR反应共35个循环, 取产物15 μL于15 g/L琼脂糖凝胶中电泳, 用凝胶成像扫描及分析系统, 测定目的基因与内参基因的积分光密度比值, 用ＳＰＳＳ软件进行分析。 1.2.4 实验分组 (1)对照组（A组）: 不加入任何干扰因素; (2) TGFβ1作用组（B组）: 在培养液中加入TGFβ1（终浓度5 μg/L）; (3)Ang(17)组（C组）: 在培养液中加入Ang(17)（终浓度10-6 mol/L）; (4)TGFβ1+ Ang(17)组（D组）: 浓度同上。每组均为5个样本, 在96孔板中培养。药物干预时间均为24 h。 1.2.5 统计学分析 实验结果用x±s表示, 采用单因素方差分析（F检验和q检验）进行组间比较, Plt;0.05表示差异有统计学意义。采用SPSS13.0软件进行统计学分析。 2 结果 2.1 Ang(17)对TGFβ1诱导GMC增殖的影响 与对照组相比, TGFβ1（5 μg/L）可明显促进GMC增殖(Plt;0.05); Ang(17)（10-6 mol/L）明显抑制GMC增殖(Plt;0.05); 同时Ang(17)组+TGFβ1的促细胞增殖作用也有明显抑制作用（Plt;0.05, 表1）。 表1 Ang(17)对TGFβ1诱导G