生物化学课件2.酶3反应动力学.pptx

第五节;一、酶的活力与测定 酶的分离纯化： 材料选择及预处理 酶抽提：酶抽提选择的pH应该在酶的pH稳定范围内，同时pH最好能远离等电点，酸性酶蛋白用碱性溶液抽提，碱性酶蛋白用酸性溶液抽提；大多数蛋白质在低浓度的盐溶液中较易溶解，一般抽提时缓冲液的选择0.02-0.05mol.L-1磷酸缓冲液；抽提温度0-4℃。 分离纯化：溶解度（盐析、等电点、有机溶剂等）得到粗制品，再根据酶分子大小、电荷性质、亲和专一性等用离心、层析、电泳、结晶、冷冻干燥等方法分离纯化，参考蛋白质分离纯化。 ;1、酶活力;测定酶活力，应测定酶促反应的初速度。初速度与酶量呈线性关系，初速度代表制剂中酶的含量。;3、酶活力测定方法;4、酶活力的表示方法（最适条件下25OC）;酶活力的测定条件：足够的底物浓度、最适pH、最适温度、适合的缓冲液、适量的激活剂及辅助成分、去除抑制剂、适合的终止反应及检测方法 ;（一）底物浓度对反应速度的影响;;在低底物浓度时, 反应速度与底物浓度成正比，表现为一级反应特征。;当底物浓度较低时;随着底物浓度的增高;当底物浓度高达一定程度;两个假设： *E与S形成ES复合物的反应是快速平衡反应，而ES分解为E及P的反应为慢反应，反应速度取决于慢反应即 V＝k3[ES]。 * S的总浓度远远大于E的总浓度，因此在反应的初始阶段，S的浓度可认为不变即[S]＝[St]。 ;1913年Mi