半滑舌鳎雌性特异基因CSW3重组蛋白的表达与应用.pdfVIP

第 36 卷 第 3 期 渔 业 科 学 进 展 Vol.36, No.3 2 0 1 5 年 6 月 PROGRESS IN FISHERY SCIENCES Jun., 2015 DOI: 10.11758/yykxjz / 半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)雌性特异基因 CSW3 重组蛋白的表达与应用* 1,2 2 2 2 2① 王天姿 王 娜 胡乔木 邵长伟 陈松林 (1. 中国海洋大学海洋生命学院 青岛 266003; 2. 农业部海洋渔业可持续发展重点实验室 中国水产科学研究院黄海水产研究所 青岛 266071) 摘要 CSW3 基因序列来源于半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)全基因组测序项目，是经过筛选得 到的雌性特异候选基因之一。本研究探索了半滑舌鳎雌性相关基因CSW3 的表达与应用，构建了半 滑舌鳎雌性特异CSW3 基因重组表达载体，通过大肠杆菌进行了体外重组表达，对基因表达产物进 行分离纯化，并通过蛋白转染的方法研究了纯化的蛋白对几个性别相关基因的影响。结果显示，雌 性特异CSW3 重组蛋白注射鱼体后对半滑舌鳎性腺foxl2 、sox9a 、amh 这3 种性别相关基因的表达 水平具有显著影响，能够引起雌性相关基因foxl2 表达上调、雄性相关基因sox9a 和amh 表达下降。 从蛋白水平对雌性相关基因CSW3 的基因功能进行初步研究，为半滑舌鳎性别控制及全雌苗育种提 供基因资源及技术方法。 关键词 半滑舌鳎; 重组蛋白; CSW3; 蛋白转染; 性别相关基因 中图分类号 S965 文献标识码 A 文章编号 2095-9869(2015)03-0030-06 半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)是我国特有的 1999; Tannour-Louet et al, 2010; Matsuda et al, 2002; 名贵经济海水养殖鱼类，主要分布于黄渤海区，属于 邓思平等, 2008a; Chen et al, 2014) 、芳香化酶基因 近海温水性底层鱼类。由于其肉质鲜美、营养丰富， (邓思平等, 2008b)、amh 、sox9 (Fukada et al, 1995; Ito 深受消费者喜爱。半滑舌鳎雌、雄个体在生长速率上 et al, 1995; 常重杰等, 2000; Nakamoto et al, 2005; Dong 存在巨大差异，雌性比雄性生长快 2−3 倍。由于雄性 et al, 2011)、GSDF 等基因。另外，dmrt4 、foxl2 (Dong 个体生长缓慢、个体小，致使半滑舌鳎的养殖成本升 et al, 2011; Tannour-Louet et al, 2010; Uhlenhaut et al, 2009)、sox10 、dax1 、dmrt3 、wtl 、sfl 和tra2 基因也 高，降低了养殖产量和效益，严重影响了半滑舌鳎苗 种的推广，阻碍了半滑舌鳎养殖产业的发展。半滑舌 有报道。在半滑舌鳎中已克隆出dmrtl 、cyp19a (Deng et al, 2008)、foxl2 、sox9a 、figla 等性别相关基因(孙 鳎性别决定类型为 ZW 型，雌性具有特异的W 染色 建等, 2014) ，并从蛋白水平上对雄性特异基因dmrt1 体。半滑舌鳎全基因组测序工作的完成为半滑舌鳎雌