化疗对乳癌患者外周血淋巴细胞亚群及CD4+CD25+CD127-调节性T细胞的影响.doc

化疗对乳腺癌患者外周血淋巴细胞亚群及 CD4+CD25+CD127-调节性T细胞的影响 康文喜 樊 静 河北省秦皇岛市第四医院 邮编：066001 摘要： 目的 探讨化疗对乳腺癌患者外周血CD4+CD25+CD127-调节性T细胞及T、B、NK淋巴细胞亚群的动态变化及其临床意义。方法 采用流式细胞仪术分析129例乳腺癌患者CD4+CD25+CD127-调节性T细胞水平及CD3、CD4、CD8、NK、B细胞和CD4/CD8比值的动态变化，并进行化疗前后、组织类型和TNM分期的对比分析。结果 化疗后乳腺癌患者CD4+CD25+CD127-调节性T细胞比率降低，CD3、CD4、CD4/CD8值增高，CD8、NK和B细胞亚群降低 ；调节性T细胞的数量与临床分期和组织分化程度有关。 结论 乳腺癌患者化疗后的免疫调节抑制功能下降，免疫功能得到提高，但体液免疫及NK功能未见提高。 关键词 乳腺癌 化疗 CD4+CD25+CD127-调节性T细胞 流式细胞术 目前化疗是乳腺癌的主要治疗手段，也是规范化治疗的重要部分。由于化疗药物在杀伤肿瘤细胞的同时，也会损害正常细胞免疫细胞，[1]。本文通过检测乳腺癌患者化疗前后外周血CD4+CD25+ CD127-调节性T细胞及T淋巴细胞各亚群变化，分析化疗对机体免疫功能的影响，探讨Treg与肿瘤及临床转归的关联性,为乳腺癌的治疗提供新的理论依据。 1.1 研究对象 本组129例均为我院2009年2月-2010年12月经病理确诊的手术后乳腺癌患者，年龄27~65岁，平均年龄（41.23±6.71）岁，无自身免疫疾病，治疗前未使用过任何免疫调节剂和免疫抑制剂等影响免疫功能的药物。 1.2 主要试剂及仪器 流式细胞仪—EPICS XL为美国BECKMAN COULTER 公司产品。CD3-PC5、CD4-FITC、CD8-PE、CD19-FITC、CD16-FITC、CD56-PE 、CD3-PC5 、CD4-PC5、CD25-FITC CD127-PE荧光标记单克隆抗体、同型对照IgG1或IgG2荧光抗体、红细胞裂解液等试剂均为美国贝克曼库尔特（BECKMAN COULTER）公司出品。 1.3 实验方法 所有观察对象均于化疗前1天，化后1周清晨空腹抽取静脉血2ml，EDTA-2K抗凝，使用直接免疫荧光标记法标记细胞并进行流式细胞仪分析。操作步骤：取不同荧光标记的单克隆抗体各2 0μl分别加入100μl EDTA-2K抗凝的外周血，室温下孵育15分钟，再加入红细胞裂解液孵育10 分钟，离心1500转/5分钟，加入PBS 2ml洗两次，弃上清后加入适量的PBS，混匀后上机检测。 1.4.化疗药物：采用紫杉类+蒽环类联合化疗。 1.4 统计学处理　实验结果应用SPSS13.0统计分析软件，采用t检验进行统计学分析，统计学差异确定为 p＜0.05。 2.结果 2.1 乳腺癌患者化疗前后CD4+CD25+CD127-/CD4+T比率变化（见表1）：化疗前患者调节性T细胞比率为4.65±1.38,化疗后调节性T细胞为2.43±1.06，检测结果显示化疗后调节性T细胞水平较化疗前明显降低，差异具有统计学意义。 表1. 化疗前后调节性T细胞比率变化 分析对象 n CD4+CD25+CD127-/CD4+T % 化疗前患者 化疗后患者 129 129 4.65±1.38 2.43±1.06 P 值 ＜0.01 2.2 乳腺癌患者化疗前后淋巴细胞亚群数值的变化（见表2）： 表2 显示，CD3、CD4、CD4/CD8化疗后较化疗前测定结果均增高，CD8、CD16/56 、CD19化疗后较化疗前均降低。 组 别 n CD4 CD8 CD3 CD4/CD8 CD16+56 CD19 化疗前 129 36.5±4.9 29.5±9.0 65.9.±7.8 1.20±0.33 13.9±7.6 8.1±5.6 化疗后 129 40.9±4.9 27.5±9.2 79.6±7.8 1.44±0.63 10.6±6.7 7.0±4.8 P值 ＜0.01 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.01 ＜0.01 ＜0.05 表2 129例乳腺癌患者治疗前后淋巴细胞亚群的比较 乳腺癌中CD4+CD25+CD127-/CD4+ T比率在不同组织学类型的变化（见表3）