高糖、胰岛素对肾小球系膜细胞GLUT4、P21表达.pdfVIP

高糖、胰岛素对肾小球系膜细胞GLUT 、P21 表达 4 及细胞骨架蛋白F-actin 的影响1 2 黄颂敏 ，唐万欣，柳飞，付平，周莉，刘芳 四川大学华西医院肾内科 摘 要：目的 探讨高糖、胰岛素对肾小球系膜细胞（GMC）GLUT4、P21表达及细胞骨架蛋白F-actin 的 影响，进一步研究上述因子在糖尿病肾病发生发展中的重要作用。方法 将培养的鼠 1097 系膜细胞分为 8 组：正常对照组，生理浓度胰岛素组（10-9 -8 -6 M），低浓度胰岛素组（10 M），高浓度胰岛素组（10 M），高 糖组（30mM），甘露醇组，高糖加高浓度胰岛素组，高糖加生理浓度胰岛素组。采用RT-PCR法检测GLUT4 mRNA、 P21 mRNA含量， rhodamine-phalloidin染色，激光共聚焦显微镜观察F-actin形态并测定荧光强度。流 式细胞仪测各组GMC大小。结果 1、正常系膜细胞可检测到GLUT4 mRNA、P21 mRNA。2、高糖组GLUT4 mRNA 表达明显下降，P21mRNA表达明显增加；不同浓度胰岛素刺激GMC中GLUT4 mRNA表达存在浓度—效应关系； P21mRNA表达越高，细胞前向角度散射光（FSC）越强，GMC体积越大。 3、高糖组F-actin荧光强度明显下降，不同浓度胰岛素与F-actin荧光强度存在浓度-效应关系。4、GLUT4 mRNA表达与F-actin荧光强度变化呈同向关系，相关系数为 0.786 （p0.05）。结论 1、高糖刺激导致GMC 肥大，P 表达上调和GLUT4 表达下调均参与这一过程。GLUT4、P 在GMC表达变化参与了DN早期GMC肥大— 21 21 肾小球肥大的发生。2、高糖可抑制GLUT4 mRNA表达及促进F-actin解聚，胰岛素有一定拮抗作用，且呈 剂量依赖性。3、GLUT4 、P21、F-actin是糖尿病肾病发生发展中的重要因子。 关键词：糖尿病肾病；葡萄糖转运蛋白 4；纤维状肌动蛋白；P21 糖尿病肾病（Diabetic Nephropathy, DN ）是主要的微血管并发症之一，是导致糖尿病患者死亡的重 要原因。DN发病机制尚未完全阐明，一般认为是多因素共同作用的结果，其中高血糖的毒性作用是最重 要的因素之一。近年来，在血糖稳定中起着关键作用的胰岛素反应性葡萄糖转运蛋白 4（Glucose Transporter 4, GLUT4 ）正受到人们的重视，葡萄糖转运的信号传导成为目前研究的热点。已有研究证实肾小球系膜 细胞、入球小动脉平滑肌细胞，肾小管髓袢升支粗段上皮细胞中均有GLUT4 表达[1]，GLUT 在DN 的发生 4 发展中扮演什么角色， 目前尚无人研究。当胰岛素与细胞膜受体结合后，将产生一系列的信号，刺激细 胞浆中含GLUT4 的囊泡易位至细胞膜从而完成葡萄糖的转运。已有研究发现PI3K及cbl/CAP是两条引起 GLUT4 易位、葡萄糖转运的重要信号传导途径[2,3] 。这两条信号传导途径最终要通过细胞骨架的基础蛋白 ——纤维状肌动蛋白 （F-actin ）作用触发GLUT4 囊泡易位[4] 。DN早期即出现肾小球肥大，其中系膜细胞 [5] 肥大起着重要作用，已经证实各种因素对细胞生长的影响最终发生在细胞周期水平 。细胞周期调控依赖 于一系列细胞周期调控蛋白，其中P21是已知的最具广泛活性的细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂，P21与系 膜细胞肥大的关系也