苏州赛德生物技术有限公司流式CBACytometricBeadsArray.DOC

流式CBA（Cytometric Beads Array）方法 ------------检测大鼠细胞因子方案实验所需试剂RAT IFN-GMA CBA FLEX SET （558305） 规格：100TST 组成：Rat IFN-γ 标准品（4ml稀释TOP浓度10000pg/ml），Rat IFN-γ PE 检测二抗试剂，Rat IFN-γ捕捉微球（定位：A6） RAT IL-10 CBA FLEX SET （558306） 规格：100TST 组成：Rat IL-10 标准品（4ml稀释TOP浓度10000pg/ml），Rat IL-10 PE 检测二抗试剂，Rat IL-10捕捉微球（定位：A8） RAT IL-6 CBA FLEX SET （558308） 规格：100TST 组成：Rat IL-6 标准品（4ml稀释TOP浓度10000pg/ml），Rat IL-6 PE 检测二抗试剂，Rat IL-6捕捉微球（定位：A9） RAT TNF CBA FLEX SET （558309） 规格：100TST 组成：Rat TNF 标准品（4ml稀释TOP浓度10000pg/ml），Rat TNF PE 检测二抗试剂，Rat TNF捕捉微球（定位：C8）Rat IL-1a Flex Set (560159) 规格：100TST 组成：Rat IL-1a标准品（4ml稀释TOP浓度10000pg/ml），Rat IL-1a PE 检测二抗试剂，Rat IL-1a捕捉微球（定位： A4）Rat IL-2 Flex Set (561420) 规格：100TST 组成：Rat IL-2标准品（4ml稀释TOP浓度10000pg/ml），Rat IL-2 PE 检测二抗试剂，Rat IL-2捕捉微球（定位：Bead E5）Rat IL-4 Flex Set (558307) 规格：100TST 组成：Rat IL-4标准品（4ml稀释TOP浓度10000pg/ml），Rat IL-4 PE 检测二抗试剂，Rat IL-4捕捉微球（定位：Bead B9）BD Cytometric Bead Array(CBA) Mouse/Rat Soluble Protein Master Buffer Kit(558266) Reagent Quantity(558266) Assay Diluent 1 bottle, 30 mL Capture Bead Diluent 1 bottle, 5 mL Detection Reagent Diluent 1 bottle, 5 mL Wash Buffer 1 bottle, 130 mL Instrument Setup Bead A1 1 vial, 0.25 mL Instrument Setup Bead A9 1 vial, 0.25 mL Instrument Setup Bead F1 1 vial, 1.0 mL Instrument Setup Bead F9 1 vial, 0.25 mL PE Instrument Setup Bead F1 1 vial, 0.25 mL PE Positive Control Detector 1 vial, 0.5 mL 2．实验操作步骤： 准备Rat Soluble Protein Flex Set标准品 （Rat Soluble Protein Flex Set标准品为干粉状态，与检测试剂混合前首先应该重新稀释。） 打开即将用于检测对应细胞因子标准品瓶子，将所有干粉转移到15ml流式上样管中，用4ml Assay Diluent溶液稀释重悬，此管标记为TOP Standard，室温静止15min。 然后取9根管子，分别标记为1:2，, 1:4, 1:8, 1:16, 1:32, 1:64, 1:128, 和1:256；每根管子加入500ulAssay Diluent稀释液，按照下图依次转移500ul到下一管，完成梯度稀释。最后取根管标记为0pg/ml，只加入500ulAssay Diluent稀释液。 最终实现如下表格的浓度梯度。 2.2混合Rat Soluble Protein Flex Set捕捉微球（捕捉微球为50倍浓度保存，使用前应稀释为最佳反应浓度） 按照实验要求，每种微球单次检测母液量为1ul，公式为：总体积=捕捉微球种类数*1ul*检测样本数+（捕捉微球种类数*1ul*检测样本数*49） 将稀释好的捕捉微球标记为“Mixed Capture Beads”待用，不能长时间储存。 稀释待测样本： 大鼠标准品覆盖范围为40 to 10,000 pg/mL，如果预测待测样本