消乳块胶囊抑制DMBA诱发大鼠乳腺癌及其机制.doc

消乳块胶囊抑制DMBA诱发大鼠乳腺癌及其机制摘要：目的：观察消乳块胶囊对二甲基苯蒽(DMBA)诱发SD大鼠乳腺癌的影响及其机制。方法：50天龄splflgue-Dawley系健康雌性禾孕大鼠30只随机分为3组：模型组、治疗组和对照组。模型组和治疗组大鼠均先经两次DMBA(15rag溶于1.5mL芝麻油，间隔1周)灌胃造模，同时治疗组大鼠以消乳块胶囊0.4g/(kgd)灌胃，持续给药，在第14周处死。大鼠乳腺组织及肿瘤组织均作常规病理，免疫组化检测ERa、ERB、PR、AhR的表达，酶联免疫吸附法测定血浆E2、P、LH、FSH水平。结果：治疗组癌变率明显低于模型组(P20％者依阳性细胞数由少至多、着色由浅至深依次为+、++、+++、++++。并分别计1、2、3、4、5、6分。 1.6　数据处理 各组动物癌变率比较用Fisher确切概率法检验。受体表达和血清激素水平均以均数±标准差(x±s)表示，各组之间的比较采用随机区组设计资料的方差分析。所有数据在SPSS13.0软件包上处理。 2　结果 2.1　实验期间各组动物生长情况 每周定期对各组大鼠称体重，观察动物进食及生长情况，实验期间对照组、模型组、治疗组分别有1只、3只和2只大鼠死亡，大鼠均在早期死亡且未见肿块产生。死因主要为肺部感染、肝脏坏死等，可能与DMBA毒性和灌胃所致的气道阻塞有关。 2.2　大鼠乳腺组织病理学观察 大鼠乳腺组织和肿块镜下观察发现，除对照组外，大多数大鼠有不同程度的增生或癌变发生(见图1)。其中治疗组癌变率为25.0％，与模型组(71.4％)比较有统计学意义(P 物，某些器官组织在细胞活跃增殖的情况下易受致癌物作用而发生肿瘤。这可能是由于在DNA复制过程中，由于致癌物的干扰产生结构异常的DNA，从而引起细胞恶变，产生组织肿瘤，因而本实验在大鼠出生50天左右给予致癌剂，此时幼鼠乳腺细胞处于增生阶段，DNA合成能力较高，对致癌剂易感性强，易产生肿瘤。对于DMBA诱导大鼠乳腺癌形成的分子特征，文献认为大鼠诱发性乳癌多为激素依赖性，均有ER和PR的阳性表达，由DMBA诱发大鼠乳腺癌中(21天时给药)，到24周观察结果，PR表达水平明显增高(34.2％)，ER的两种亚型ERa和ERβ表达也明显增高，分别为65.8％和70.3％，ERα和ERβ共表达的为51.3％。笔者的实验结果发现ERβ、PR在模型组和治疗组中表达明显增高，同时笔者在实验中还发现了AhR的表达也明显增高，但奇怪的是笔者的实验均未见到ERa的表达。 ERB、AhR和PR在乳腺癌变与增生组织中表达丰富，主要机制可能是AhR介导的AhR－ER交互应答(CROSS－talk)，诱导雌激素信号下游基因的表达。目前多数研究表明，除了遗传背景外，激素与化学因素是乳腺癌发病率持续上升的主要原因，而且，大约3/4的乳腺癌为激素依赖性肿瘤。即使是居住与生活环境的恶化造成的乳腺癌发生增加，乳腺肿瘤组织中仍表达甾体激素受体，并对激素治疗敏感，说明激素与化学因素在乳腺癌发生、发展过程中有协同，研究认为环境致癌物(多数为芳香烃类化合物)通过AhR介导的基因表达是最主要的作用机制，AhR是一个配体激活的核转录因子，许多有机污染物都是它的配体，其作用模式类似于甾体类受体。芳香烃受体核内AhR复合物是由AhR和Amt(AhR nuclear transloctor，AhR核易位子)蛋白组成的异聚体，该异聚体(AhR/Amt)结合到芳香烃受体应答基因(AhR－responsive gene)调节区内的二恶英反应元件(dioxin responsive dements，DREs)，诱导靶细胞表达致癌信号蛋白并发挥作用。此外，还可以通过AhR－ER信号通路之间的交互应答(cross-talk)促进雌激素信号通路的传递，表现为雌激素样作用或雌激素协同作用，使这类致癌物诱发的肿瘤表现为激素依赖性。因此，由于本实验中所使用的致癌剂DMBA也属于多环芳香烃类化合物，结合本实验中大鼠乳腺肿瘤不表达ERα，但PR、ERβ表达明显增加，其中也有AhR表达增加，说明DMBA诱导大鼠产生激素依赖性乳腺肿瘤的机制也可能就是通过AhR介导的AhR-ER交互应答实现的。 笔者的实验结果表明，消乳块胶囊能抑制9，10－二甲基苯蒽(DMBA)诱导的大鼠乳腺肿瘤形成，有较明显的作用。免疫组化检测发现ERβ在治疗组中表达明显增高，结合治疗组癌变率最低，这提示消乳块胶囊对DMBA诱导的大鼠乳腺恶性肿瘤的预防，其机制之一可能是通过ERβ介导的保护作用实现的。有研究发现ERα和ERβ通过雌激素反应元件(ERE)途径参与转录时，其活性一致，但是在非ERE途径与AP1反应时，两者表现出相反的生物