混合酶消化法大鼠颅盖骨细胞原代培养及鉴定.docVIP

混合酶消化法大鼠颅盖骨细胞原代培养及鉴定基金项目：福建省自然科学基金项目（编号：2908） 作者单位：350004 福建医科大学省立临床学院（孙玲）；福建省立医院（侯建明） 通讯作者：侯建明 【摘要】 目的 通过不断的摸索，寻找一种获得细胞数量较多且纯的原代成骨细胞的体外培养方法，为下一步实验研究奠定基础。方法 取出生24 h内的SD大鼠脱臼处死，取出颅盖骨，剪成1 mm×1 mm×1 mm大小的组织片；采用胰酶和Ⅰ型胶原酶混合酶消化法分离获得原代成骨细胞；采用“差速贴壁法”进行纯化。通过对细胞形态学的镜下观察，碱性磷酸酶染色及Ⅰ型胶原免疫组化法等对细胞进行鉴定。结果 镜下观察所获得的细胞具有成骨细胞的典型特征，细胞多为单核，呈三角形、多边形、长梭形等形态，并伸有粗大伪足；碱性磷酸酶染色及Ⅰ型胶原免疫组化染色呈阳性。结论 采用混合酶消化法可获得数量较多且活性较好的细胞，再采用“差速贴壁法”可以去除成纤维细胞等杂质细胞，获得纯度较高的成骨细胞。 【关键词】 成骨细胞； 原代培养； 大鼠； 混合酶消化法 Primary culture and identification of rats cranial cover osteocytes SUN Ling,HOU Jian-ming.Fujian Medical Uniersity, Fuzhou 3500