紫草素对NIH小鼠肾系膜细胞增殖影响.docVIP

紫草素对NIH小鼠肾系膜细胞增殖影响关键词 紫草素 小鼠肾系膜细胞 细胞凋亡 流式细胞术 狼疮肾炎是系统性红斑狼疮(SLE)的常见表现，也是预后不良的重要征兆。传统的治疗药物虽然有一定的治疗作用，但常引起较严重毒性反应。所以，探索狼疮肾炎新的治疗药物，成为治疗SLE的重要课题。紫草为紫草科植物紫草，商品多取新疆紫草和内蒙紫草的干燥根，是常用中草药。紫草素是从紫草中提取的重要化学成分，与紫草相似。紫草素具有多种药理特性，包括抗炎、抗肿瘤及促进伤口愈合的作用[1-2]，紫草素已用于防治糖尿病肾病和肾小球肾炎[3]，抑制人类系膜细胞的增殖、凋亡和细胞外基质的产生[4]。本研究拟从紫草素对肾系膜细胞的增殖的影响方面，研究紫草素对肾炎的治疗机制。 1 材料和方法 1．1 材料：分述如下。 1．1．1 实验动物：新西兰大白兔， 4．0kg，3只；NIH小鼠20只，体重(25．0±2．0)g；购于浙江中医药大学动物实验中心。均在浙江中医药大学动物实验中心标准饲养房饲养，室温20℃,相对湿度40%~60%，每日光照12h，自由摄食、饮水，每周监测体重。 1．1．2 药物和主要试剂：紫草素(浙江大学肿瘤实验中心提供)，RPMI.1640培养液(1×)、Hanks缓冲液(1×)、青-链霉素溶液(100×)购自杭州市宏博生物工程有限公司，Ⅳ胶原酶、胰蛋白酶购自Sigma公司；胎牛血清购自杭州四季青生物工程材料有限公司。 1．2 方法：取新西兰大白兔3只，分别灌胃紫草素低、高剂量及生理盐水，1小时后采血，制备兔含药血清1、血清2、血清3备用。再用NIH小鼠20只，分离肾脏皮质匀浆等处理后，分别进行系膜细胞原代培养。细胞传至第5代后转移至96孔培养板中，培养48小时后分别加入含药血清1、2、3，置37℃、5%CO?2的培养箱中，培养至第24、48小时，各取出一部分细胞调至浓度为1×10?6个／ml后，上流式细胞术仪检测系膜细胞凋亡情况。 1．3 统计学处理：各组间治疗不同时间段各项指标平均值比较，采用方差分析。并以双侧可信区间进行检验。 3 结果 培养0小时，与生理盐水组的凋亡率比较，紫草素高、低剂量组差异具有显著性，分别为P0．05与P0．01；与紫草素高剂量组比较，紫草素低剂量组和生理盐水组差异有显著性，分别为P0．05和P0．01。培养24小时后，与生理盐水组的凋亡率比较，紫草素高、低剂量组差异具有显著性，分别为P0．05、P0．01；与紫草素高剂量组比较，紫草素低剂量组和生理盐水组差异有显著性，分别为P0．01和P0．01。培养48小时后，与生理盐水组的凋亡率比较，紫草素高、低剂量组差异具有显著性，分别为P0．05、P0．01；与紫草素高剂量组比较，紫草素低剂量组和生理盐水组差异有显著性，分别为P0．01和P0．01，见表1。 4 讨论 众所周知，狼疮肾炎是导致SLE患者死亡的重要原因。然而，目前SLE患者很少直接死于尿毒症，除非不能进行肾脏替代治疗。对狼疮肾炎的早期干预，阻止终末期肾病的发生是治疗SLE的重要目标。肾小球系膜细胞在狼疮肾炎的炎症中处于中心地位，系膜细胞增生是增殖性肾炎中最常见的病理表现。在免疫复合物、补体、C5b~9、内毒素和生长因子等共同作用下，系膜细胞增生并被活化，活化的系膜细胞可产生许多炎症介质如蛋白酶、氧代谢活性产物、IL-1及生长因子等，可不依赖中性粒细胞引起肾小球炎症。本研究通过体外实验表明，紫草素可促进肾系膜细胞凋亡，并具有剂量依赖性，因此，紫草素可能通过抑制系膜细胞增殖而改善LN肾增殖性病理损伤。 5 参考文献 ［1］X.Chen,Y.L,J.Oppenheim,O.M.Z.Howard.Cellular pharmacological study of shikonin derivatives［J］.Phytother Res,2002,16:199-209. ［2］P.P.Vassilios,A.N.Assimopoulou,E.A.Couladouros,D.Hepworth,K.C.Nicolaou.The chemistry and biology of alkannin,shikonin,and related naphthazarin natural products.Angew［J］.Chem Int Ed,1999,38:270-301. ［3］Wolf G,Ziyadeh FN.The role of angiotensin Ⅱ in diabetic ne-phropathy:emphasis on nonhemodynamic mechanisms［J］.Am J Kid Dis,1997