流动注射化学发光免疫分析研究-上海有机化学研究所.PDFVIP

化学学报 AarA CHIMIOA SINICA 19M, 52, 83~88 流动注射化学发光免疫分析研究 1. 血清中乙型肝炎表面抗原的测定 张新荣 封满良 吕九如 幸竹君婚 〈陕西师范大学化学系，西安，710062) 我们首次以键合有抗体的多孔玻璃作为固相免疫分析的免疫反应器，以化学发光作为最终检测 手段，建立了一种新的、高效率的免疫分析技术一一流动注射化学发光免疫分析技术.实验表明:采 用该技术可使单次测定时间从 ELISA (Enzyme-linked Immunosorbent Assay)法的二十多小时 l降至二十分钟，且所有操作均可在微机控制下自动完成.用该方法对人血清中乙型肝炎表面抗原的 测定结果与 ELISA 法所得结果一致，对同一样品连续九次测定的相对标准偏差为 7.2%. 因此p 诸 方法具有自动化程度高、分析速度快、稳定性好等优点. 关键词:流动注射，免疫分析，化学发光. 固相免疫分析以其干扰少、灵敏度高等优点在临床检验中被广泛采用.但是，这类方法存 在着操作过程复杂，分析速度慢及难以实现自动化等缺点.从80 年代中期以来，国外陆续有 人提出将流动注射技术与固相免疫分析技术相结合同23，以提高固相免疫分析的分析速度和自 动化程度.由于最终检测多采用电化学法和光度法，灵敏度不够理想，目前仍未能用于临床样 品的测定. l 幅 本文首次以控制孔径的多孔玻璃(CPG)作为抗体固定化的载体，以增强的化学发光体系 作为最终检测手段，建立了一种新的流动注射化学友光免疫分析技术，并将其用于血清中乙型 肝炎表面抗原(HBsAg)的测定.结果表明:采用该技术，使在静态的条件下需 1，2 小时完成 的反应在2 分钟内完成，且抗原-抗体结合率达到静态条件下的 605忍，以灵敏度较高的化学发 光体系作为检测手段，弥补了这一非稳态分析技术造成的灵敏度上的损失. 此外，以 CPG 为 f 句， 载体，采用化学键合方式制成的兔疫反应器还具有稳定性好、可重复使用、容易保存等优点. 理论 在流动注射免疫分析中，抗体以化学键合的方式被结合在CPG 的表面，当含有抗原的样 品流过用固定有抗体的 OPG 填充的反应器时~.由于液流的搅动作用及类似于亲和色谱的色谱 保留作用而使抗原选择性地留在反应器内，而其它蛋白质则迅速流出反应器.其原理如下t 设。PG 上没有固定抗体，且待测样品中抗原与其它非抗原蛋白具有相近的分子量，则蛋 白质要从反应器中流出所需缓冲液的体积可用式(1) 表示[8:1 V.=Vo十K Vl . (1) d 上式中， V ; V 为反应器中 OPG 颗粒之间 为蛋白质从反应器中流出所需缓冲液的体积