试验二果蝇唾腺染色体标本的制备与观察.DOC

目 录 前 言 1 实验一 果蝇的性状观察和性别鉴定 2 实验二 果蝇唾腺染色体标本的制备与观察 3 实验三 果蝇的单因子实验 5 实验四 果蝇的伴性遗传 7 实验五 果蝇的三点测交实验 9 实验六 减数分裂的制片与观察 11 实验七 去壁低渗法制备植物染色体标本 15 实验八 染色体核型分析 18 实验九 植物多倍体的人工诱导和鉴定 20 实验十 小鼠骨髓细胞染色体标本制作与观察 22 实验十一 染色体的分带实验 24 实验十二 诱变物质的微核检测试验 26 实验十三 粗糙链孢霉的杂交 27 实验十四 太原市污水对大麦根尖遗传损伤的研究 30 前 言 遗传学实验是生物科学专业的一门专业基础课程，是一门独立的实验课程，同时也是为了配合遗传学的教学而开设的一门实验课程,本课程由验证性、综合性、设计性等多层次实验内容构成，目的在于巩固和加深学生对遗传学知识的理解、验证遗传学理论、并初步掌握遗传学研究所必需的基本实验技术。在此基础上，进行一定比例的综合性、设计性实验，将实验理论和实验技能融为一体，从而培养学生的基本实验思想、实验方法、实验技能和综合应用能力。本课程的任务是从个体、细胞、分子三个水平揭示遗传学的基本现象与规律，培养学生牢固掌握经典遗传学研究方法与技术，并初步掌握现代遗传学实验操作技能，熟悉遗传学分析方法，同时要求学生初步具备进行遗传学创新性研究的基本能力与素质。 实验一 果蝇的性状观察和性别鉴定 一、实验目的 了解果蝇的生活史，识别雌雄果蝇，观察常见的几种突变型。二、实验原理 果蝇为完全变态发育的双翅目昆虫，具有生活史短、突变型多、染色体数目少（2n=8）、繁殖率高、饲养简便等特点，是遗传学研究的好材料。果蝇的性染色体属于XY型（雌蝇为XX，雄蝇为XY）。 雌雄果蝇的主要形态特征 性状 雌蝇 雄蝇 体型 较大 较小 腹部末端 宽厚，成卵圆形，末端稍尖 窄小，呈柱状，末端钝圆 腹背黑色环纹 5条宽窄相近 3条，上部两条窄，最后一条宽，呈一明显黑斑 腹片数 6 4 性梳 无 有（位于前足附节上）形似小梳 外生殖器 阴道板、肛上板，色浅 生殖弧、肛上板及阳具等，色深 野生型和几种突变型的鉴别 性状 野生型 白眼 残翅 三隐 眼色 红 白 红 白 翅型 长 长 残 小 刚毛 直 直 直 焦 三、实验用品 1、材料果蝇（野生型 白眼 残翅 三隐）。 2、用具毛笔、麻醉瓶、白纸、乙醚。 四、实验步骤 1、将果蝇培养瓶与麻醉瓶瓶口对接，培养瓶在下，麻醉瓶在上，双手遮住培养瓶，利用果蝇的趋光性将果蝇引入麻醉瓶；或培养瓶在上，轻拍瓶壁将果蝇震入麻醉瓶。然后在麻醉瓶的小口棉塞滴加1—2滴乙醚，待麻醉后倒在白纸上观察。如乙醚滴加过量，果蝇翅膀外展死亡。 2、观察将果蝇置于解剖镜下观察，观察过程中若果蝇醒来，用麻醉瓶或培养皿扣住果蝇，塞入滴有乙醚的棉花使其麻醉。 ?五、作业 1、简述果蝇的生活史和饲养方法。 2、果蝇作为一种遗传学模式动物具有哪些优点。 本世纪初，D. KostoffD. melanogaster 果蝇幼虫的唾液腺细胞核中发现了特别巨大的染色体——唾液腺染色体（salivary gland chromosome）。m宽，400(m长，比普通中期相染色体大得多（约100～150倍），所以又称为多线染色体（polytene chromosome）giant chromosome）。n=2×4，II、III染色体为中部着丝粒染色体，第IV和第I（Xchromocenter），band）。 HCl 改良石炭酸品红染液。 3、用具：显微镜 解剖针 吸水纸 载玻片 盖玻片。 四、实验步骤 1、选材：取培养好的充分发育的幼虫，通常取爬到瓶壁上即将化蛹的大幼虫即是三龄幼虫。 2、唾腺剖取：在载玻片上滴一滴 0.7％ NaCl溶液幼虫放在其中。两手各持一解剖针，左手针压在虫体后段1/3处，不使移动，右手针压住虫体的头部（有一黑色口器），用力右拉，头部扯离，唾腺随之拉出，（可见一对微白，半透明的长形小囊，即为唾腺），其侧面常带有少量泡沫状、颜色稍深的脂肪体，注意区别，并用解剖针将其拨离。如唾腺未被拉出，可用针自虫体前 1/3处轻轻向前挤压，可将其挤出。（图4） 3. 解离：用滤纸吸取多余盐水，再唾腺上 滴一滴 1NHCl ，解离2-3分钟，用蒸馏水洗净，然后让唾腺在蒸馏水中吸涨10-15分钟。 4、染色：将水吸干后滴上几滴改良苯酚品红于唾腺上，染色10分钟（及时补充液）。 5、压片：盖上盖玻片, 左手指按压住, 同时用右手大拇指指肚稍用力摁压盖玻片,然后用铅笔头轻敲盖片，最后用吸水纸吸尽多余染液，使唾腺细胞核破裂,核中的染色体舒展开来。 6、观察：将压好