乳酸菌的测试方法.doc

产品中乳酸菌的测试方法 菌种名称 培 养 基及培养方法 培养基 培养方法 嗜热链球菌 M17 琼脂 M17 琼脂37°C培养72小时 乳酸杆菌总数 MRS 琼脂 ，强化盐酸半胱氨酸至0.05% 厌氧培养 37°C培养72小时 嗜酸乳杆菌 MRS琼脂+氯洁霉素 PH5.4 MRS 琼脂用10%的乙酸酸化 厌氧培养: 37°C培养72小时 干酪乳杆菌 MRS琼脂，pH5.4 MRS 琼脂用10%的乙酸酸化 厌氧培养: 25°C/37°C培养72小时 双歧杆菌 RCM 琼脂 + NNLT (抗生素溶液) 强化盐酸半胱氨酸至0.05% 厌氧培养: 37°C培养72小时 培养基准备： - 稀释剂： - 用无菌的胰化胨溶液稀释做细菌的菌落计数( 除了双歧杆菌) 。 -双歧杆菌的菌落计数必需用无菌的胰化胨和盐酸半胱氨酸溶液稀释 参见文章第三页。 - 培养基 : - M17 琼脂：用商品M17 培养基，按说明配制。 MRS琼脂：用商品MRS培养基，按说明配制。灭菌前用乙酸调节PH 到5.4 。 RCM琼脂：用商品RCM培养基，按说明配制。灭菌后在使用之前，在RCM培养基中加入NNLT 溶液。 胰化胨溶液: 组成(g/l)?: - 胰蛋白胨 1 g - NaCl (氯化钠) 8,5 g - 蒸馏水 1000 ml - 溶液分装，数量小于100 毫升的，用灭菌锅121oC 灭菌15 分钟，数量大于100 毫升的， 121oC 灭菌20 分钟。 保存：4°C 下保藏一个月。 胰化胨溶液 + 盐酸半胱氨酸 : 组成 (g/l) : - 胰蛋白胨 1 g - NaCl (氯化钠) 8,5 g - 蒸馏水 1000 ml + 盐酸半胱氨酸 0,5 g - 溶液分装，数量小于100 毫升的，用灭菌锅121oC 灭菌15 分钟，数量大于100 毫升的，121oC 灭菌20 分钟。 保存： 4°C 下保藏一个月。 RCM + NNL T 1/ RCM Agar 琼脂( 强化梭状芽孢杆菌琼脂 ) (Hirsh Grinsted, Barnes Ingram, 1956 ). 灭菌锅121oC 灭菌15分钟。 2/ NNLT 溶液 : I组成： -新霉素硫酸盐(Sigma) 0. 1 g -奈啶酮酸 (Sigma) 0.015 g -氯化锂 (Sigma) 3.0 g -TTC (Merk) 0.025 g -蒸馏水 50 ml 溶液用避光瓶装。过滤灭菌(0.45μm 过滤器)。 保存： 4oC下保藏一个月。 3/ 5%盐酸半胱氨酸溶液： 组成： - 盐酸半胱氨酸 5 g - 蒸馏水 100ml 灭菌锅121oC 灭菌15分钟。 保存： 4oC下保藏一个月。 准备 : 在使用之前，以5%的比例将NNLT溶液在无菌条件下加入RCM琼脂中，并按1%比例加入5%浓度的盐酸半胱氨酸溶液。 MRS + 氯洁霉素溶液? 1/ 氯洁霉素溶液?: 组成?: -氯洁霉素 0.01g -蒸馏水 200ml 溶液分瓶装。过滤灭菌(0.45μm 过滤器)。 保存： 4oC下保藏一个月。 2/ MRS + 氯洁霉素 (选择性培养基) : 准备 : 在使用之前，以0.2%的比例将氯洁霉素溶液在无菌条件下加入MRS琼脂中。 附加说明： 乳酸杆菌总数的计数方法用于检测所有的乳酸杆菌，在没有其它乳杆菌存在的情况下，可用于检测保加利亚乳杆菌，如有其它乳杆菌存在则需用减差法将其分开。 干酪乳杆菌厌氧培养: 25°C/37°C培养72小