堆肥速效氮测定实验指导(12环科)20150529.docVIP

腐熟堆肥中铵态氮、硝态氮测定实验指导书 实验目的 了解和掌握堆肥中铵态氮、硝态氮测定方法 了解评价堆肥腐熟度常用的化学评价指标 实验原理 KCl溶液浸提剂可把堆肥中水溶性的NO3-、NH4+浸提出来。NH4+在强碱性介质中与次氯酸盐和苯酚作用，生成水溶性染料靛酚蓝，溶液的颜色很稳定。在含氮0.05~0.5 mol﹒L-1的范围内，吸光度（波长625nm）与铵态氮含量成正比，可用比色法测定。NO3-N的硝酸根-N=O发色团在紫外光区20nm附近有明显吸收，且吸光度大小与硝酸根离子浓度成正比。但堆肥浸出液含有杂质，需要在波长20和275nm处分别测量其吸光度，前者是硝酸根和以有机质为主的杂质的吸收值，后者是以有机质为主的杂质的吸收。因为275nm处硝酸根已无吸收，故可将A275校正为有机质在20nm处的干扰吸收，从A20中减去，即得硝酸根在20nm处得真实吸收值△A（△A=A220-A275），再利用标准曲线法求得浸出液中硝态氮得含量。2 mol/L KCl （2）苯酚溶液称取苯酚（分析纯）10g和硝基铁氰化钠（硝普钠，有剧毒）100mg，稀释至1L。此试剂不稳定，须贮于棕色瓶中，在4℃冰箱中保存。 次氯酸钠碱性溶液称取氢氧化钠（分析纯）10g、磷酸氢二钠（Na2HPO4﹒7H2O）7.06g、磷酸钠（Na3PO4﹒12H2O）31.8g和52.5 g﹒L-1次氯酸钠（即含5%有效率的漂白粉溶液）10 mL溶于蒸馏水中，稀释至1L，贮于棕色瓶中，在4℃冰箱中保存。掩蔽剂将400g﹒L-1的酒石酸钾钠（KNaC4H4O6.4H2O,化学纯）溶液与100 g﹒L-1的EDTA二钠盐溶液等体积混合。每100mL混合液中加入10 mol﹒L-1氢氧化钠0.5mL。 10％硫酸2.5μg.mL-1NH4+-N标准液称取于105℃烘制2小时的硝酸钾0.3609克溶于蒸馏水，转移至500毫升容量瓶中，用蒸馏水定容即配制成硝态氮标准溶液100μg/的贮存溶液。临用时稀释至20μg/mL硝态氮标准溶液。20μg/mLNO3-N标准溶液称取干燥的硫酸铵[（NH4）2SO4分析纯0.4717g溶于蒸馏水中，定容至1L。即配制成含铵态氮（N）100μg.mL-1的贮存溶液；使用前加，即配制成含铵态氮（N）2.5μg.mL-1的标准溶液备用。 实验步骤 1 待测液制备 称取堆肥样品10.00 g(准确到0.01g)于250mL瓶中，加入按固液比=1:10加入2 mol/L KCl 溶液（100 mL），塞紧塞子，在振荡机上振荡30min，同时做空白。取出离心过滤，澄清的滤液收集于干燥洁净的三角瓶中。 2 铵态氮的测定 吸取待测液2mL放入50mL容量瓶中，将KCl溶液补充至10mL，然后加入苯酚溶液5mL和次氯酸钠碱性溶液5mL，摇匀。在20℃左右的室温下放置30min后，加掩蔽剂1mL以溶解可能产生的沉淀物，然后用蒸馏水定容至刻度。用1cm比色槽625nm波长处进行比色，读取吸光度。 3 硝态氮的测定 吸取待测液20mL入试管中，加入0.8mL10％硫酸，摇匀。分别于20nm和275nm处测定吸光度。注意，不要每测一个样品改变一次波长，以避免逐次改变波长而引入波长重现性误差。若浸出液吸光度太大，可用KCl溶液稀释，但应按比例加入硫酸溶液。? 4 标准曲线绘制 （1）铵态氮 分别吸取2.5μg.mL-1NH4+-N标准液0.00、2.00、4.00、6.00、8.00、10.00mL于50mL容量瓶中，各加10mLKCl溶液，然后加入苯酚溶液5mL和次氯酸钠碱性溶液5mL，摇匀。在20℃左右的室温下放置30min后，加掩蔽剂1mL以溶解可能产生的沉淀物，然后用蒸馏水定容至刻度，此时铵态氮溶液的浓度分别为0.00、0,10、0.20、0.30、0.40、0.50μg/mL。用1cm比色槽625nm波长处进行比色，读取吸光度。 （2）硝态氮 吸取20μg/mLNO3-N标准溶液0.00、0.50、1.00、2.00、3.00、4.00mL分别置入50mL中，用水定容至刻度后，再加入2mL10％硫酸溶液，摇匀。浓度分别为0.00、0.20、0.40、0.80、1.20和1.60μg/mL。于20nm处测定标准系列的吸光度，绘制标准曲线或建立回归方程。 实验数据记录 待测液中铵态氮、硝态氮比色测定结果（单位：OD） 项目 NH4-N NO3-N 重复1 重复2 210nm 275nm 重复1 重复2 重复1 重复2 空白 堆肥1 堆肥2 标准曲线 铵态氮浓度（μg/mL） 吸光度值（OD） 硝态氮浓度（μg/mL） 吸光度值（20nm OD）