洁净区沉菌测定规程.doc

XXXXXXX有限公司 洁净区（室）沉降菌测定操作规程 编号 页 数 共页 制定人 制定日期 年 月 日 修订日期 年 月 日 审核人 审核日期 年 月 日 颁发部门 批准人 批准日期 年 月 日 生效日期 年 月 日 分发部门 1.目的:明确洁净区(室) 沉降菌的质量控制标准，规范洁净区(室) 沉降菌的检验操作方法 2.适用范围：洁净区(室) 沉降菌的控制和测试方法，及车间洁净室和洁净区无菌室或无菌区域（包括洁净工作台）的沉降菌的测定和环境的验证。 3.责任者：质量控制部洁净区(室) 沉降菌检验操作人员车间QC检验操作人员。 4.操作内容和方法： 4.1.定义： 4.1.1菌落 4.1.1.1细菌培养后，由一个或几个细菌繁殖而形成的一细菌集落，简称CFU，通常用个数表示。 4.1.1.2 沉降菌 ⑴ 用规定的方法收集到的活微生物粒子，通过专用的培养基，在适宜的生长条件下繁殖到可见的菌落数。 4.2.应对微生物进行动态监测，评估无菌生产的微生物状况。 4.2.1监测方法有沉降菌法、定量空气浮游菌采样法和表面取样法（如棉签擦拭法和接触碟法）等。 4.2.2动态取样应当避免对洁净区造成不良影响。成品批记录的审核应当包括环境监测的结果。 4.2.3对表面和操作人员的监测，应当在关键操作完成后进行。在正常的生产操作监测外，可在系统验证、清洁或消毒等操作完成后增加微生物监测。 4.2.4洁净区微生物监测的动态标准(1)如下： 洁净度级别 浮游菌 cfu/m3 沉降菌（(90mm） cfu /4小时(2) 表面微生物 接触（(55mm） cfu /碟 5指手套 cfu /手套 A级 (1 (1 (1 (1 B级 10 5 5 5 C级 100 50 25 － D级 200 100 50 － 4.2.4.1表中各数值均为平均值。 4.2.4.2单个沉降碟的暴露时间可以少于4小时，同一位置可使用多个沉降碟连续进行监测并累积计数。 4.3. 沉降菌测试操作方法： 4.3.1洁净区沉降菌控制限度： 洁净度级别 沉降菌/皿 测定频次 洁净度级别 沉降菌/皿 测定频次 A级 ≤1 1次/日 D级 ≤100 1次/月 C级 ≤50 1次/周 4.3.2、测试操作方法： 4.3.2.1本测试方法采用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净区的洁净度。 4.3.2.2所用的仪器和设备 ⑴ 高压消毒锅：使用时应严格按照仪器说明书操作。 ⑵ 恒温培养箱： 必须定期对培养箱的温度计进行检定。 ⑶　培养皿：　一般采用Ф90mm×15mm的硼硅酸玻璃培养皿。 ⑷　培养基：普通肉汤琼脂培养基（微生物限度检查法）或其他药典认可的培养基。 4.3.3.测试操作步骤： 4.3.3.1采样操作方法：将已制备好的培养皿按4.2.4.2的要求放置，打开培养皿盖，使培养基表面暴露4h，再将培养皿盖盖上后倒置。 4.3.3.2培养。 ⑴ 全部采样结束后，将培养皿倒置于恒温培养箱中培养。 ⑵ 在30℃--35℃培养箱中培养，时间不少于72h。 ⑶ 每批培养基应有对照试验，检验培养基本身是否污染。可每批选定3只培养皿作对照培养。 4.3.3.3菌落计数： ⑴　用肉眼直接计数，标记或在菌落计数器上点计，然后用5—10倍放大镜检查，有否遗漏。 ⑵　若培养皿上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辨时仍以2个或2个以上菌落计数。 4.3.3.4. 操作注意事项： ⑴ 测试用具要作灭菌处理，以确保测试的可靠性、正确性。 ⑵ 采取一切措施防止人为对样本的污染。 ⑶ 对培养基、培养条件及其他参数作详细的记录。 ⑷ 由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察，不要漏计培养皿边缘生长的菌落，并须注意细菌菌落与培养基沉淀物的区别，必要时用显微镜鉴别。 ⑸ 采样前应仔细检查每个培养皿的质量，如发现变质、破损或污染的应剔除。 4.3.4.、测试操作规则。 4.3.4.1测试操作状态。 ⑴　沉降菌测试前，被测试洁净室的温湿度须达到规定的要求，静压差、换气次数、空气流速必须控制在规定值内。 ⑵　沉降菌测试前，被测试洁净室已经过消毒。 ⑶　测试状态有静态和动态两种，测试状态的选择必须符合生产的要求，并在报告中注明测试状态。 4.3.4.2测试人员 ⑴ 测试人员必须穿戴符合环境洁净级别的工作服。 ⑵ 静态测试时，室内测试人员不得多于二人。 4.3.4.3．测试时间： ⑴ 对单向流，如A级净化房间及层流工作台，测试应在净化