仪器第二讲20110916.ppt

生物大分子的仪器分离与分析 生物反应器工程国家重点实验室 仪器分析平台 开始上课，请同学们将手机开到静音、振动档，最好是关机！ 个人介绍 基本概念 基本概念 基本概念 仪器分析的分类 仪器分析的发展趋势 分析仪器的性能指标 精密度：分析数据的精密度指同一台分析仪器的同一方法多次测定得到数据间的一致程度 灵敏度：指区别具有微小浓度差异分析能力的度量，取决于校准曲线的斜率和仪器设备的重现性或精密度。 检出限：物质检出的最低浓度范围 动态范围（线性范围） 响应速度：指仪器对检测信号的反应速度，定义为仪器达到信号总变化量一定百分数所需的时间 分辨率：指仪器鉴别由两组近组分产生信号的能力，不同类型仪器分辨率的指标不同 分析仪器的性能指标 灵敏度：仪器的灵敏度用校准灵敏度表示，即校准曲线的斜率，随所选用的校准物质不同，灵敏度的数据不同，仪器制造商提供的灵敏度数据，一般应提供测试条件和校准物质。 检出限：仪器的检出限需要指出所使用/针对的物质 分析仪器的性能指标 分析仪器的性能指标 仪器定量校准方法：内标法和外标法 内标法：标准物质和被测定物质不是同一物质 外标法：标准物质与被测定物质是同一物质 分析方法的建立 分析方法的建立 分析方法的建立 分析方法的建立：发酵液中葡萄糖含量的测定 分析方法的建立 文献检索要注意以下问题： 在建立分析方法时要注重寻找经典的分析方法，要注重从书本上系统地收集相关理论知识而不是仅仅看Paper 在使用每台设备之前要仔细的阅读说明书/操作手册，而不是简单的向师兄/师姐学习 文献仅供参考，不能认为文献上的东西就一定是对的，很多的方法、结果在未经过亲手验证之前，不能假设它就是对的 要确保检索数据的准确性：通过多个来源数据的一致性来保证数据的准确性，开题报告所有引用的数据都必须标明出处； 看文献要注重看他人的实验思路、实验方法和实验设计，以及结果的表示方法、对于结果的讨论分析，而不是仅仅关注他人的实验结果（水平）； 对于需要参考的重要方法，要注意该方法的适用范围，要查到最原始的文献。 分析方法的建立：发酵液中葡萄糖含量的测定 分析方法的建立：发酵液中葡萄糖含量的测定 分析方法的建立：预实验 分析方法的建立 ：专一性 分析方法的建立 ：灵敏度 分析方法的建立：定量限 分析方法的建立 ：线性范围 分析方法的建立 ：精密度 分析方法的建立 ：准确度 分析方法的建立 分析方法的建立 ：耐用性 分析方法的建立 ：撰写SOP 分析方法的建立 ：撰写SOP 仪器分析的一般过程 仪器分析的一般过程：取样 仪器分析的一般过程：预处理 仪器分析的一般过程：仪器校正 仪器分析的一般过程：样品测量 仪器分析的一般过程：数据处理 紫外-可见吸收光谱分析法 概 述 光吸收的基本定律 紫外可见光分光光度计 定性与定量分析 定义 基于物质对光的选择性吸收而建立起来的分析方法称为吸光光度法，包括比色法、可见分光光度法及紫外分光光度法等。采用分光光度计对物质吸光度进行测定，从而求出物质含量的方法，称之为分光光度法。 紫外-可见吸收光谱分析法是利用物质的分子对某一波长范围的光的吸收作用，对物质进行定性分析、定量分析及结构分析的方法。 按所吸收光的波长区域不同，分为紫外分光光度法(200-400nm)和可见分光光度法(400-760nm)，合称为紫外—可见分光光度法(200-760nm)。 分光光度法是在比色法( colorimetry)的基础上发展起来的。 分光光度法与比色法区别 比色法只限于在可见光区，分光光度法则可以扩展到紫外光区和红外光区。 比色法用的单色光是来自滤光片，谱带宽度从40－120nm，精度不高，分光光度法则要求近于真正单色光，其光谱带宽最大不超过3－5nm，在紫外区可到1nm以下，来自棱镜或光栅，具有较高的精度。 紫外—可见分光光度法特点 仪器设备和操作都比较简单，费用少，分析速度较快。 灵敏度较高。 有较好的选择性。通过适当地选择测量条件，一般可在多种组分共存的体系中，对某一种物质进行测定。 精密度和准确度较高。在仪器设备和其他测量条件较好的情况下，其相对误差可减小到1％一2％。 用途广泛。医药、化工、冶金、环境保护、地质等诸多领域---已成为必不可少的测试手段之一。 无机和有机物质--定性和定量测定,结构分析。 理论上将具有同一波长的光称为单色光，由不同波长的光组成的光称为复合光。 人眼能感觉到的光称为可见光，它的波长范围约为400—760nm。白光(日光、白炽灯光、日光灯光等)是由各种不同色光按一定强度比例混合而成的。 一束白光通过三棱镜可分为红、橙、黄、绿、青、蓝、紫等七种色光，这七种色光可以混合为白光。实验证明，如果把适当的两种色光按一定强度比例混合，