幽门螺杆菌培养方法和其尿素酶纯化的研究.docVIP

幽门螺杆菌培养方法及其尿素酶纯化的研究 硕士研究生：刘建东 导　　　师：周曾芬　教授 单位：昆明医学院第一附属医院消化内科 中文论文摘要 目的：探讨大量培养幽门螺杆菌（H.pylori）的方法，从H.pylori标准菌株NCTC11639中提取与纯化尿素酶（Urease）。方法：采用单因子试验统计分析技术对H.pylori固体和液体培养技术进行优化筛选。以哥伦比亚培养基（CAB）为基础培养基进行固体培养，在复苏和传代培养中，分别观察不同添加剂（10%冻融羊血（SB）、10%绵羊血清（SBS）和0.1%β环糊精（β-CD））、不同室温下空气中暴露时间（1h和3h）和不同抽气负压（-0.075Mpa、-0.070Mpa和-0.065Mpa）对H.pylori培养质量（产量和形态）的影响；以BHIB为基础培养基进行液体培养，观察四种不同添加剂（5%小牛血清（CBS）、10%CBS、10%SBS和0.1%β-CD）对H.pylori液体培养产量的影响。比较不同固、液培养体系的效费关系。用旋涡振荡和冻融法粗提尿素酶，再用Q Sepharose FF阴离子交换层析、Phenyl Sepharose HP疏水相互作用层析和Source 30S Sepharose阳离子交换层析进行纯化，测定纯化出的尿素酶的活性和纯度，计算蛋白浓度和总蛋白回收率。用SDS和Western blotting进行鉴定