5种猪病多重PCR检测方法的建立.pdfVIP

• 21 • 中国畜牧兽医 2014 年第 41 卷第 2 期 生物技术 5 种猪病多重 PCR 检测方法的建立 王隆柏l ，张志刚2 ，苏永裕2 ，车勇良l ，吴学敏l ，周伦江l (1.福建省农业科学院畜牧兽医研究所，福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心，福建福州 350013; 2. 肉食品安全生产技术国家重点实验室，福建厦门 361100) 摘要:为建立猪群常见疫病多重 PCR 诊断方法，本研究据 GenBank 发袤的猪瘟病毒(classical swine fever virus , CSFV) 、 猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrorne virus , PRRSV) 、猪伪狂犬病病毒(pseudorabies vi rus ， PRV) 、猪圆环病毒 2 型 (porcine circovirus type 2 ,PCV2) 和猪细小病毒(porcine parvovirus. PPV) 基因序列，设计并合成 了 5 对特异性引物。通过反应条件优化、特异性、敏感性和重复性测定，建立了能同时扩增 C5FV、 PRR5V、 PRV、 PCV2 、 PPV 5 种病毒的多重 PCR 方法。结果表明该方法只能检测出 CSFV、 PRRSV、 PRV、 PCV2、 PPV 5 种病毒，不能检测出猪流感病毒 (swine influenza virus ,5IV) 、猪乙型脑炎病毒Japanese encephalitis virus .JEV) 、猪链球菌(Streρtococcus suis .55) 和猪流行性 腹泻病毒(porcine epidernic diarrhea virus. PEDV) .能检测到 C5FV、 PRR5V、 PRV、 PCV2 和 PPV 的核酸浓度分别为 220 、1. 6 、 72 、 400 和 370 阁。初步应用结果表明，建立的多重 PCR 方法适用于对 CSFV、 PRRSV、 PRV、 PCV2 和 PPV 的快速诊断。 关键词:猪瘟病毒;猪繁殖与呼吸综合征病毒;猪伪狂犬病病毒;猪圆环病毒 2 型;猪细小病毒;多重 PCR; 建立 中围分类号:5852.65 文献标识码:A 文章编号:1671-7236(2014)02-0021-04 近年来，随着中国养猪业规模化、集约化蓬勃发 多重 PCR 检测则可克服这些问题。多重 PCR 不同 展，猪病的发生和流行对养猪生产的危害日趋加重， 于单重 PCR，它是在一个反应体系中，通过多对引 且多病原混合感染己成为当前猪群疫病流行的主要 物同时扩增几种病毒的 RNA 或 DNA(Markoulatos 形式与特点(陈焕春， 2011 )。猪瘟病毒(classical 等， 2002) 。因此，建立一种快速可靠的多重 PCR 检 swine fever virus , CSFV) 、猪繁殖与呼吸综合征病 测方法，对提高猪群疫病诊断的实效性，具有重要的 毒(porcine reproductive and respiratory syndrome 现实意义和应用前景。 virus , PRRSV) 、猪伪狂犬病病毒(pseudorabies vi- 1 材料与方法 rus ， PRV) 、猪圆环病毒 2 型 (porcine circovirus 1. 1 病毒毒株 PRRSV、 CSFV、 PRV、 PCV2 ， type 2 , PCV2 )和猪细小病毒(porcine parvovìrus , PPV、猪流感病毒