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山东医药2016 年第56 卷第22 期 Notch 信号报告系统在前列腺 肿瘤细胞系中的建立 秦丽霞，崔剑，申海莲，高维强 (上海交通大学医学院附属仁济医院，上海2∞127) 摘要:目的在前列腿肿瘤细胞系 LNCaP中建立 Notch 信号报告系统。方法采用In-Fusìon 酶系统将巨细胞 病毒(CMV)启动子和 Notch 蛋白胞内结构域(ICO) 细胞核内 ONA 结合蛋白 CSL 的 8 拷贝串联 ONA 序列克隆入 川X叫怦Nl 慢病毒载体，构建 No仙信号报告重组慢病毒表达质粒(pLVX-8XCSL-acGFP) 。在人胚肾293T 细 胞中转染pLVX-8XCSL-acGFP 质在或对照质粒pLVX咽GFP， 6 h 后再转染 Notch 受体的细胞内结构域(NICO) 的表 达质粒pETP-NICO( 过表达NICO) 或对照质粒pE币。转染48 h 后用荧光显微镜观察GFP 的表达，用流式细胞仪进 行荧光定量分析。然后将pLVX-8XCSL-acGFP 质粒及对照质粒包装成慢病毒转导前列脏癌细胞系 LNCaP， 72 h 后 荧光显微镜观察绿色荧光，用流式细胞仪分选出 GFP 荧光强度最强5%及最弱5% 的细胞。提取这两部分细胞的 RNA，采用 qRT-PCR 方法检测细胞中 Notchl 、 Notch2以及 Notch 信号通路下游靶基因 Heyl 的表达。结果 在转染 pLVX-8XCSL-acGFP 的 293T 细胞中，转染 pETP-NICO 的细胞荧光强度较转染 pETP 对照质粒的细胞增加了约 10 倍;而在转染 pLVX-acGFP 的 293T 细胞中，转染 pETP-NICO 的细胞与转染 pETP 对照质粒的细胞荧光强度无明显 差异。根据pLVX-8XCSL-acGFP 荧光强度分选出的 LNCaP 细胞，荧光强度高的细胞 Notchl 、 Notch2、 Heyl 表达高于 荧光强度弱的细胞(P 均 0.05) 。结论 在LNCaP细胞中 pLVX-8XCSL-acGFP 可以作为报告Notch 信号水平的有 效工具。 关键词:前列腺肿瘤;LNCaP细胞;人胚肾 293T 细胞;Notch 基因;信号报告系统 doi: lO. 3969/j. issn. 1∞2-266X. 2016.22.αn 中固分类号:R737.25 文献标志码:A 文章编号:1∞2-266X(2016 )22，，(问27-04 Establishment of Notch signaling pathway repo此er system ín prostate cancer cell line QIN Lixia , CUI Jian , SHEN Hailian , GAO Weiqiang (Renji Hospital , Shanghai Jiaoωng University School 01 Medicine , Shanghαi 200127 , China) Abstract: Objective To establish a Notch signaling reporter system in prostate cancer cellline LNCaP. Methods We set up a Notch signaling 陀porter system by first constructing a lentivirus plasmid (pLVX-8XCSL-acGFP) which contai. ning a tandem of8 copy transfactor CSL DNA binding elements driven by a CMV promoter. Then the 293T cells were trans- fected wi也 pLVX-8XCSL-acGFP plasmids for 6 h or with pLVX-acGFP plasmids as a control group , respectively. Further- more , 293T cells in each of the ahove group we