UVA致人皮肤成纤维细胞急性和慢性光损伤模型的建立.pdfVIP

监堕皮肤科杂志2却014 年4拍3 卷第 l口2 期 JCαlin Derm】 a创tol， 阮Dec臼哩咽:err口I由e町r2却014， Vol.咽43， 阮N0ι川.1口 2 703 论著 UVA致人皮肤成纤维细胞急性和慢性 光损伤模型的建立 侯巍1 ，郑跃2 ，许庆芳2 ，刘晨2 ，陆春2 ，赖维2 (1.新疆医科大学第一附属医院皮肤科，新疆乌鲁木齐 830054; 2. 中山大学附属第三医院皮肤科，广东 广州 510630) [摘 要l 目的:探讨人皮肤成纤维细胞(human dermal fibroblasts , HDFs)急性和慢性光损伤模型建立的方法。方法:体外培养 原代人皮肤成纤维细胞，选取第4-8 代的细胞进行实验。用长波紫外线(UVA)单次照射建立 HDFs 急性光损伤模型，荧光倒置 显微镜观察不同剂量 UVA 照射后第 1 ， 2 ， 3 天 HDFs 的形态变化;CCK-8 法检测照射后 HDFs 的增殖活性。慢性光损伤 HDFs 模型采用 8-甲氧沙林(8-MOP)避光孵育细胞24 h ，随后以含 8-MOP 的磷酸盐缓冲液(PBS)置换培养基，行 9 J/cm2 UVA 照射， 照射完成后换 Dulbecco 改良 Eagle 培养基(DMEM)(含 10%胎牛血清)避光传代培养，21 d 后显微镜下观察 HDFs 形态;衰老相 关-ß-半乳糖背酶(SA-ß-Gal)染色法计算衰老细胞率。结果:单次 UVA 照射导致 HDFs 增殖率下降，与 UVA 剂量呈正相关。 2 2 2 UVA 在剂量为主主10 J/cm 时，细胞存活率保持在850毛;而 UVA 剂量~ 15 J/cm 时细胞存活率明显降低; ~20 J/cm 时存活率为 2 时仅为约 50%左右，至 25 J/cm 25%。慢性光损伤 HDFs 诱导组(即 UVA+MOP 组)几乎所有细胞均出现体积变大、细胞颗粒增 加等细胞老化的特征性改变;SA-ß-Gal 染色细胞的阳性率959毛。结论:UVA 单次照射可成功建立 HDFs 急性光损伤模型， UVA 联合8-MOP 构建HDFs 慢性光损伤模型。 [关键词l 光老化;急性光损伤;皮肤成纤维细胞 [中图分类号] R751 [文献标识码] A [文章编号] 1000-4963(2014)12-0703-04 Establishment of acute and chronic photodamge models in human dermal fibroblasts by UVA-irradiation HOU Wei , ZHENG Yue , XU Qing-fang, LIU Chen , LU Chun , LAI Wei (Depart阳nt of Dermmology and Venereology, the First A庐， limed Hospitol of Xinjiang Medicol University, Urumqi 830054, China) [Abstract] Objective: To explore the methods of establishing acute and chronic photo