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渗透冲击联合超声和去污剂处理对新生牛真皮组织学和生物活性成分的影响 陈博，彭代智，左海斌，郑必祥，周灵，周新，刘敬 基金支持：国家高技术研究发展计划(863 计划, 2006AA02A121)；国家重点实验室自主研究课题(SKLZZ200904) 作者单位：第三军医大学附属第一医院全军烧伤研究所，创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室，重庆， 400038 通讯作者：彭代智，电话 023 - E - mail： dzpengmd@126.com 摘要 目的 采用渗透冲击联合超声和去污剂处理新生牛真皮，观察处理前后新生牛真皮基质的组织学和生物活性成分的变化。 方法 从 8 头健康雄性新生牛皮肤获取网状层真皮组织。采用反复渗透压改变、超声震荡和去污剂联合法对新生牛网状层真皮进行处理，HE 染色、DAPI 染色和核酸电泳检测细胞成分残留情况；扫描电镜 (SEM) 观察胶原束结构和细胞成分；PicoGreen 法、DMMB 法和 BCA 法对脱细胞前后真皮基质的 DNA、sGAG 和蛋白质含量进行定量分析；ELISA 法测定脱细胞前后真皮基质内 bFGF 、TGF-β1、 KGF 和 EGF 含量。 结果 形态学观察可见脱细胞处理后的真皮三维结构完整，胶原纤维束排列较疏松，细胞清除较彻底，未见明显细胞及细胞碎片残留。与脱细胞处理前比较，脱细胞处理后的 DNA 含量 [(2516.1 ± 324.2) ng/mg vs (249.5 ± 53.8 ng/mg) (P=0.000)]、 sGAG 含量 [(5.92 ± 0.50) μg/mg vs (2.48 ± 0.24) μg/mg (P=0.000)]、TGF-β1 含量 [(1698.6 ± 965.8) pg/g vs (721.1 ± 443.9) pg/g, P=0.009]和EGF 含量[ (21.04 ± 5.54) pg/g vs未能检测到EGF含量] 均明显减少部分数据反了？；而 bFGF 含量[(788.6 ± 333.8) pg/g vs (364.8 ± 294.8) pg/g, P=0.424] 虽然没有统计学意义，但均数之间相差2倍之多。和 KGF[(0.033 ± 0.00019) pg/g vs (0.033 ± 0.00022) pg/g, P=0.433]变化不显著。 结论 反复渗透冲击联合超声和去污剂处理对新生牛真皮基质明显地清除了细胞及细胞碎片，较好地保留了真皮细胞外基质的三维结构和主要生物活性成分，为进一步改进脱细胞真皮的制备方法提供了重要实验依据。 关键词：真皮；细胞外基质；渗透冲击；超声；生长因子 Effect of osmotic shock combined with sonication and detergent treatment on histology and bioactive components of newborn bovine dermis Chen Bo, Peng Daizhi, Zuo Haibin, Zheng Bixiang, Zhou Ling, Zhou Xin, Liu Jing (Institute of Burn Research, Southwest Hospital, State Key Laboratory of Trauma, Burns and Combined Injury, Third Military Medical University, Chongqing, 400038, China) Corresponding author: Peng Daizhi, Tel: 023 E-mail: dzpengmd@126.com [Abstract] Objective To evaluate the impact of osmotic shock combined with sonication and detergent treatment on histology and bioactives of newborn bovine dermis. Methods The reticular dermis was prepared from neonatal male bovine skin (n=8), and sequentially treated with osmotic shock, sonication and Triton X-100. HE staining, DAPI staining and nucleic acid electrophoresis were used to evaluate cellular