常用菌种保存方法微生物具有容易变异的特性-中国试剂网.PDF

中国试剂网 常用菌种保存方法 微生物具有容易变异的特性，因此，在保藏过程中，必须使微生物的代谢处于最 不活跃或相对静止的状态，才能在一定的时间内使其不发生变异而又保持生活能 力。 低温、干燥和隔绝空气是使微生物代谢能力降低的重要因素，所以，菌种保 藏方法虽多，但都是根据这三个因素而设计的。 保藏方法大致可分为以下几种： 1．传代培养保藏法 又有斜面培养、穿刺培养、疱肉培养基培养等（后者作保藏厌氧细菌用）， 培养后于 4—6 ℃冰箱内保存。 2 ．液体石蜡覆盖保藏法 是传代培养的变相方法，能够适当延长保藏时间，它是在斜面培养物和穿刺 培养物上面覆盖灭菌的液体石蜡，一方面可防止因培养基水分蒸发而引起菌种死 亡，另一方面可阻止氧气进入，以减弱代谢作用。 3 ．载体保藏法 是将微生物吸附在适当的载体，如土壤、沙子、硅胶、滤纸上，而后进行干 燥的保藏法，例如沙土保藏法和滤纸保藏法应用相当广泛。 4 ．寄主保藏法 用于目前尚不能在人工培养基上生长的微生物，如病毒、立克次氏体、螺旋 体等，它们必须在生活的动物、昆虫、鸡胚内感染并传代，此法相当于一般微生 物的传代培养保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法%POST /bbs/post.php?ac ... post.php?action=new 亍? 5 ．冷冻保藏法 可分低温冰箱（-20—-30℃，-50—-80℃）、干冰酒精快速冻结（约-70℃） 和液氮（-196℃）等保藏法。 6 ．冷冻干燥保藏法 先使微生物在极低温度（-70℃左右）下快速冷冻，然后在减压下利用升华 现象除去水分（真空干燥）。 有些方法如滤纸保藏法、液氮保藏法和冷冻干燥保藏法等均需使用保护剂来 中国试剂网 制备细胞悬液，以防止因冷冻或水分不断升华对细胞的损害。保护性溶质可通过 氢和离子键对水和细胞所产生的亲和力来稳定细胞成分的构型。保护剂有牛乳、 血清、糖类、甘油、二甲亚砜等。 三、器材 细菌、酵母菌，放线菌和霉菌； 肉膏蛋白胨斜面培养基，灭菌脱脂牛乳，灭菌水，化学纯的液体石蜡，甘油， 五氧化二磷，河沙，瘦黄土或红土，冰块、食盐，干冰，95 ％酒精，10％盐酸， 无水氯化钙； 灭菌吸管，灭菌滴管，灭菌培养皿，管形安瓿管，泪滴形安瓿管（长颈球形 底），40 目与 100 目筛子，油纸，滤纸条（0 ．5×1 ．2cm ），干燥器，真空泵， 真空压力表，喷灯，L 形五通管，冰箱，低温冰箱（-30℃），液氮冷冻保藏器。 四、操作步骤、各保藏法的应用范围及优缺点 下列各法可根据实验室具体条件与需要选做。 1．斜面低温保藏法 将菌种接种在适宜的固体斜面培养基上，待菌充分生长后，棉塞部分用油纸 包扎好，移至 2—8 ℃的冰箱中保藏。 保藏时间依微生物的种类而有不同，霉菌、放