急性坏死性胰腺炎中TLR4及NF-κB关系的实验的分析研究.pdfVIP

上海交通大学硕士研究生论文 急性坏死性胰腺炎中 TLR4 与 NF-κB 关系的实验研究 急性坏死性胰腺炎中 TLR4 与NF-κB 关系的 实验研究 摘 要 研究背景：急性坏死性胰腺炎(Acute necrotizing pancreatitis，ANP) 是一种常见的急重症，发病率、死亡率高。经研究证实多种细胞因子如 TNF-α、IL-1β、IL-6 等活化与急性胰腺炎(Acute pancreatitis，AP) 的发生 进展关系密切。而 Toll 样受体 4(Toll-like receptor 4 ，TLR4) 、核因子 -κB(Nuclear factor-kappaB ，NF-κB)与这些细胞因子的活化密切相关。它 们在 AP 发生发展中作为介导炎症反应的枢纽起着重要作用。以往认为 TLR4 与 NF-κB 是上下游关系：即 TLR4 触发细胞内信号传导通路，从 而激活 NF-κB ，调控大量细胞因子释放，介导炎性反应。目前认为能激 活 NF-κB 的除了TLR4 调控的细胞内信号通路外还有 TNF-α、IL-1 调控 的细胞内信号通路，且对 TLR4/NF-κB 信号通路具体的传导路径又有了 新的认识。因此有必要重新认识 TLR4 与 NF-κB 之间的关系。 研究目的：观察 ANP 大鼠胰腺组织中 TLR4 的表达情况；并且应用 NF-κB 活 化 抑 制 剂 四 氢 化 吡 咯 二 硫 代 氨 基 甲 酸 酯 (pyrrolidine dithiocarbamate，PDTC)进行干预，观察阻断 NF-κB 以后，TLR4 在 ANP 大鼠胰腺组织中表达的变化，探讨 ANP 中 TLR4 与 NF-κB 的关系及 上海交通大学硕士研究生论文 急性坏死性胰腺炎中 TLR4 与 NF-κB 关系的实验研究 NF-κB 的活性对TLR4 表达的影响。 研究方法：1）雄性 SD 大鼠 72 只，随机分为假手术组(24 只) 、ANP 组（24 只）、PDTC 预处理组（24 只）三组。胰管内注入 5%牛磺胆酸钠 建立大鼠 ANP 模型；PDTC 预处理组在建立 ANP 模型前 1h，100mg/kg 腹腔注射 PDTC 。HE 染色及透射电镜观察胰腺组织病理学改变；酶动 力化学法检测血清淀粉酶（AMS ）和乳酸脱氢酶（LDH ）；ELISA 法检 测血清 TNF-α、IL-1β、IL-6 ；RT-PCR 法检测胰腺组织 TNF-α、IL-1β、 IL-6 mRNA 表达；免疫组化及 Western blot 法检测胰腺组织 TLR4 和 NF-κB 蛋白表达。 研究结果：1）同假手术组相比，ANP 组大鼠胰腺组织光镜下有明 显出血、腺泡坏死和炎症浸润；电镜下大鼠腺泡细胞粗面内质网明显扩 张、酶原颗粒明显减少、线粒体明显肿胀；血清 AMS 和 LDH 含量增加 （P0.05 ）；血清 TNF-α、IL-1β、IL-6 含量增加（P0.05 ）；胰腺组织 TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA 表达增加（P0.05 ）；胰腺组织 TLR4 和 NF-κB 表达增加（P0.05 ）。 2 ）同ANP 组大鼠相比，PDTC 预处理组大鼠胰 腺组织出血、腺泡坏死和炎症浸润程度明显减轻；电镜下胰腺组织病理 学改变明显减轻；血清 AMS 和 LDH 含量，TNF-α、IL-1β、IL-6 含量明 显减少（P0.05 ）；胰腺组织 TNF-α、IL-1β、IL-6mRNA 表达，TLR4 和 NF-κB 表达明显减少（P0.05 ）。 主要结论及意义： 1 ）TLR4 和 NF-κB 在 ANP 大鼠胰腺组织中的表 上海交通大学硕士研究生论文 急性坏死性胰腺炎中 TLR4 与 NF-κB 关系的实验研究 达水平明显增高，提示TLR4 和NF-κB 在AN