稻瘟病菌MgKIN1、MgS20和MgS32基因的克隆及分析.pdfVIP

捅要 致病分子机制对稻瘟病菌的防治意义重大。同时，作为丝状真菌致病机理与分子 生物学研究的模式，Mgrisea重要功能基因的克隆对了解其它病原真菌与寄主的 互作也具有重要意义。Mgrisea的侵入前过程，特别是附着胞的分化与形成，已 经有很好的研究基础：而侵入后病菌的定殖、菌丝的分化与扩展等过程的机制却 不够清楚。 稻瘟病菌附着胞是稻瘟病菌在侵入水稻组织前形成的一种侵染结构，是稻瘟 病菌侵染过程中的一个关键环节。了解稻瘟病菌附着胞阶段基因表达的情况对于 弄清附着胞的形成、发育和侵入机制具有重要意义。 驱动蛋白Kinesin是美国加州大学的RonaldD．Vale等人在1985年首次在鱿 鱼的大轴突的运动中发现，当存在ATP的水解类似物AMP．PNP时，该蛋白可 以与微管稳定连接，而当加入ATP或KCI(氯化钾)后，该蛋白又很快与微管 STet 分开(BradyaL，1985)。 驱动蛋白最初作为马达沿着微管正极运输膜细胞器，并在神经轴突中，使膜 细胞器与微管之间形成交叉桥。在本论文中，它作为附着胞形成过程中运输细胞 器的结构蛋白，研究其功能对附着胞的形成具有重要作用。主要研究结果如下： 1．在稻瘟病菌数据库中查询驱动蛋白Kinesin得到5条EST序列，选取E 驱动蛋白家族，MAD为有丝分裂控制点蛋白家族。编码区总长度为5643bp，编 码1723个氨基酸残基的多肽。MgKINl基因编码驱动蛋白的动力域，其含有约 330个氨基酸，球状N末端头部域含有ATP结合域和微管结合域，是马达与微 管蛋白结合和催化ATP水解的部位，c末端域与轻链相互作用。 基因在M．grisea的营养菌丝、分生孢子中均表达，其中孢子中的表达量相对较高。 3．通过构建MgKINl基因置换载体和多次敲除转化，共获得250个潮霉素 抗性转化子，通过PCR和Southern杂交没有得到真正的突变体，初步表明基因 敲除不能得到MgKINl的突变体。 4．Aldo／keto还原酶家族包含许多K+通道B链调节链，具有氧化还原酶活 化，共获得165个潮霉素抗性转化子，通过PCR验证没有得到真正的突变体； 潮霉素抗性转化子，通过PCR验证没有得到真正的突变体，所以准备考虑使用 其它的方法来获得他们的突变体。 基因 and and functional Cloning analysisofMgKINl，MgS20 in MgS32genesMagnaporthegrisea Abstract awell-known thatcausesriceblast．Abetter is ascomycete Magnaporthegr妇ea ofthemolecularbasisofthisdiseaseisbeneficialforrice contr01． understanding blast a of has infection Asmodel typical fungalpathogen，皿grisea processes，including and differentiation．Isolationoffunctional conidiation，germination appressofium of is tothe ofother interactions． genesM．gr括eahelpful understandingfungal—plant The