有机化学实验十柱色谱.docVIP

实验十 柱 色 谱 实验目的： 1. 学习柱色谱的原理及方法。 实验重点和难点： 学习柱色谱的原理及方法。 实验类型：基础性 实验学时：4学时 实验装置和药品： 主要实验仪器：色谱柱(或25mL碱式滴定管) 25mL锥形瓶 普通漏斗 玻璃棉或脱脂棉 量筒 试管 电子天平 烧杯 主要化学试剂：石油醚（600C—900C） 丙酮 中性氧化铝(100--200目) 500g 菠菜色素 95%乙醇 实验装置图： 实验原理： 柱色谱法是色谱方法之一。 色谱法是分离、纯化和鉴定有机化合物的重要方法之一。 色谱法的基本原理： 是利用混合物中各组分在某一物质中的吸附或溶解性能(即分配) 的不同，或其它亲和作用的性能的差异，使混合物的溶液流经该种物质，进行反复的吸附或分配等作用，从而将各组分分开。 色谱法的分类： 1.根据组分在固定相中的作用原理不同，可分为吸附善谱、分配色谱、离子交换色谱、排阻色谱等。 2.根据操作条件的不同，可分为柱色谱、纸色谱、薄层色谱、气相色谱及高效液相色谱等类型。 柱色谱原理： 柱色谱是化合物在液相和固相之间的分配，属于固--液吸附层析。 图1就是一般柱色谱装置。柱内装有” 活性” 固体(固定相) 如氧化铝或硅胶等。液体样品从柱顶加入流经吸附柱时，即被吸附在柱的上端，然后从柱顶加入洗脱溶剂冲洗。由于固定相对各组分吸附能力不同，以不同速度沿柱下移，形成若干色带。再用溶剂洗脱，吸附能力最弱的组分随溶剂首先流出，分别收集各组分，再逐个鉴定。 吸附剂：常用的吸附剂有：氧化铝、硅胶、氧化镁、碳酸钙和活性炭等。吸附剂一般要经过纯化和活性处理。选择吸附剂的首要条件是与被吸附物及展开剂均无化学作用。吸附能力与颗粒大小有关。颗粒太粗，流速快分离效果不好。颗粒小，表面积大，吸附能力就高，但流速慢，因此应根据实际分离需要而定。色谱用的氧化铝可分酸性、中性和碱性三种。 溶质的结构与吸附能力的关系：化合物的吸附能力与分子极性有关。分子极性越强，吸附能力越大。分子中所含极性较大的基团，其吸附能力也较强。具有下列极性基团的化合物，其吸附能力按下列排列次序递增： CL－ Br－ I－〈 C=C〈 －OCH3〈 －CO2R〈 C=O 〈－CHO 〈 －SH 〈 －NH2 〈 －OH 〈 －COOH 氧化铝对各种化合物的吸附性按以下次序递减： 酸和碱 〉醇、胺、硫醇 〉酯、醛、酮 〉芳香族化合物 〉卤代物、醚 〉烯 〉饱和烃 溶剂：吸附剂的吸附能力与吸附剂和溶剂的性质有关。选择溶剂时还应考虑到被分离物各组分的极性和溶解度。 先将要分离的样品溶于一定体积的溶剂中，选用的溶剂极性应低，体积要小。如有的样品在极性低的溶剂中溶解度很小，则可加入少量极性较大的溶剂，使溶液体积不致太大。色层的展开首先使用极性较小的溶剂，使最容易脱附的组分分离。然后加入不同比例的极性溶剂配成的洗脱剂，将极性较大的化合物自色谱柱中洗脱下来。 常用的洗脱剂的极性按以下次序递增： 己烷和石油醚 〈 环已烷 〈 四氯化碳 〈 三氯乙烯〈 二硫化碳 〈 甲苯 〈 苯 〈 二氯甲烷 〈 氯仿 〈 乙醚 〈 乙酸乙酯 〈 丙酮 〈 丙醇 〈 乙醇 〈 甲醇 〈 水 〈 吡啶 〈 乙酸 所用溶剂必须纯粹和干燥，否则会影响吸附剂的活性和分离效果。 装柱：吸附柱色谱的分离效果不仅依赖于吸附剂和洗脱溶剂的选择，而且与制成的色谱柱有关。 色谱柱的大小，视处理量而定。柱的长度于直径之比约为1：10---1：20，固定相用量与分离物质的量比约为1：50---100。先将玻璃管洗净干燥，柱底铺一层玻璃棉或脱脂棉，再铺上一层约0.5cm厚的海石砂然后将氧化铝装入管内，必须装填均匀，严格排除空气，吸附剂不能有裂缝，装填方法有湿法和干法两种： 湿法：是将溶剂装入管内，再将氧化铝和溶剂调成浆状，慢慢倒入管中，将管子下端活塞打开，使溶剂流出，吸附剂渐渐下沉，加完氧化铝后，继续让溶剂流出，至氧化铝沉淀不变为止。 干法：是在管的上端放一漏斗，将氧化铝均匀装入管内，轻敲玻璃管，使之填装均匀，然后加入溶剂，至氧化铝全部润湿，氧化铝的高度为管长的3/4。氧化铝顶部盖一层约0.5cm厚的砂子，敲打柱子，使氧化铝顶端和砂子上层保持水平。先用纯溶剂洗柱，再将要分离的物质加入，溶液流经柱后，流速保持1-2滴/s，可由柱下的活塞控制。最后用溶剂洗脱。整个过程都应有溶剂覆盖吸附剂。 实验內容及步骤 ： 取25ml酸式滴定管一支作色谱柱，垂直装置以25ml锥行瓶作洗脱液的接受器。 按图所示依次装入脱脂棉。 取少量石油醚于层析柱中，打开旋塞，检查其密闭性，确定不漏水后，再加入石油醚至层析柱高的2/3