几种ProteinA亲和层析填料纯化重组单克隆抗体效果的比较.PDF

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１５，３５（１２）：７２７７ ＤＯＩ：１０．１３５２３／ｊ．ｃｂ 几种ＰｒｏｔｅｉｎＡ亲和层析填料纯化重组 单克隆抗体效果的比较 １ ２ ２ ２ ２ 何凌冰 　李　乐 　邓义熹 　蒙国基 　于玉根 （１深圳国家高技术产业创新中心　深圳　５１８０５７　２深圳万乐药业有限公司　深圳　５１８０２９） 摘要　随着表达技术的进步以及发酵技术的优化，细胞发酵上清液中抗体的滴度大幅度提高，必 然对下游纯化工艺的处理能力有更高的要求。ＰｒｏｔｅｉｎＡ亲和层析是分离单克隆抗体的一种标准 纯化方法。目前已经有很多种 ｐｒｏｔｅｉｎＡ亲和填料，其配体基本上都是大肠杆菌发酵的重组 ｐｒｏｔｅｉｎＡ。不同厂家生产的ｐｒｏｔｅｉｎＡ填料有各自不同的基质或键合技术，从而造成填料对抗体亲 和力以及对碱耐受性的差异。针对正在研发的ＷＬＢ３０３单克隆抗体，比较了６种不同的ｐｒｏｔｅｉｎＡ 填料的动态载量，并从洗脱溶液种类和ｐＨ两个方面进行单克隆抗体纯化条件的筛选，分析纯化 后样品ＳＥＣ纯度和回收率。综合考虑载量、除杂效果、回收率三个因素，ＭａｂＳｅｌｅｃｔ填料是最适合 本抗体纯化的，ＳＥＣ纯度可以达到 ９８％，回收率可以达到 １００％左右。基于这些数据，对 ＭａｂＳｅｌｅｃｔ填料进行了使用寿命试验，２００次循环之后载量仅衰减了５％。 关键词　ＰｒｏｔｅｉｎＡ　动态载量　ＳＥＣ纯度　回收率 中图分类号　Ｑ８１９ 　　ＰｒｏｔｅｉｎＡ是金黄色葡萄球菌细胞壁上的一种蛋 要同时保持足够的载量。这对ｐｒｏｔｅｉｎＡ配体是一个巨 ［１］ ［２］ 大的挑战。目前有很多ｐｒｏｔｅｉｎＡ填料的清洗方法，然而 白 ，能够选择性地与免疫球蛋白的Ｆｃ结构域结合 。 ＰｒｏｔｅｉｎＡ蛋白是由５个同源结构域和一个与细胞壁联结 对于大多数工艺来说ＮａＯＨ是最安全、最经济的。另一 ［３４］ 方面ｐｒｏｔｅｉｎＡ亲和层析的洗脱条件一般是在ｐＨ３～４之 的结构域组成 ，它通过这５个同源结构域与ＩｇＧＦｃ结 构域结合。利用重组ＤＮＡ技术，在大肠杆菌中表达不含 间，这个条件下抗体很容易聚集和沉淀［１３１５］。为了降低 细胞壁结合域的ｐｒｏｔｅｉｎＡ片段。ＰｒｏｔｅｉｎＡ配体可以偶 聚集体，提高洗脱ｐＨ是可行的。目前已经有填料试图 联到不同的基质上，例如交联琼脂糖、表面修饰的多孔玻 从提高洗脱的ｐＨ进行改进。因此ｐｒｏｔｅｉｎＡ亲和层析纯 璃、聚苯乙烯、陶瓷型外壳或者其它有机高分子材料［５８］， 化单克隆抗体时会从ＤＢＣ、分辨率（纯化效果）以及清洗 稳定性这三个方面进行考虑。 形成不同的ｐｒｏｔｅｉｎＡ填料。由于ｐｒｏｔｅｉｎＡ的高选择性 　　我们选取了６种适合大规模纯化抗体的ｐｒｏｔｅｉｎＡ 和稳定性，在实验室和工业生产中都将ｐｒｏｔｅｉｎＡ亲和层 ［９］ 填料（４种进口和２种国产）进行纯化效果的比较，以期 析作为抗体纯化的一个标准步骤 。大多工艺都将 获得最佳纯化重组抗体的填料。通过ＤＢＣ和纯化结果 ｐｒｏｔｅｉｎＡ柱子作为纯化的第一步，从澄清的细胞培养上 （样品纯度和回收率）进行比较，从中挑选出性能较好的 清液中捕获抗体［１０１２］。目前抗体的表达量不断提高，有 填料进行寿命测试，最终确定适