成熟序列。.PDF

838 朱耀魁，等. MiRNA-181 家族与恶性肿瘤的研究进展 1　MiRNA -181 家族的成员及其相互关系 miR-181 家族的各种研究报道，如没有特别指明，均指5p 成熟序列。 从2011 年11 月发布的最新版miRNA 数据库的资料 获知，原来称为miR:miR* 的成熟双链序列，现改称为5p 3　MiRNA -181 家族与恶性肿瘤 和3p 的2 条单链序列。其中来自前体序列5 ’端的成熟序 列被称为5p 单链序列，即前一版本所称的miR 单链序列； 3.1　肝癌　在肝癌的机制研究中，Bhattacharya 等[10] 发现 来自前体序列3 ’端的成熟序列被称为3p 单链序列，即前 在肝癌细胞HepG2 和Hep3B 中，OPN 的表达差异显著， 一版本所称的miR* 单链序列。以往认为，只有miR 单链 OPN 蛋白在HepG2 细胞中的表达量比其在Hep3B 细胞中 序列即5p 单链序列有生物学功能，而miR* 单链序列即3p 的表达量高12 倍之多，而Hep3B 细胞中miR-181a 的表达 单链序列没有功能，深入研究发现，很多3p 单链序列也能 量比HepG2 细胞高36 倍之多；这表明OPN 蛋白表达和 发挥基因表达调控的作用；究竟哪个序列占主导地位，主 miR-181a 表达水平在2 株不同肝癌细胞中存在反比趋势， 要取决于各自的表达丰度[3] 。人类miRNA-181 家族现有 即miR-181a 对OPN 的表达具有负调控作用，miR-181a 的 6 个前体序列，分别是hsa-mir-181a-1、hsa-mir-181a-2 、 表达越高，OPN 表达就越低。随后通过生物信息学预测和 hsa-mir-181b-1、hsa-mir-181b-2 、hsa-mir-181c 和hsa-mir- 萤光素酶检测，从理论和实验两方面均证实了miR-181a 在 181d ；并表达出8 个成熟序列，分别是hsa-miR-181a-5p 、 肝癌细胞中的直接调控靶标就是OPN，并且还能通过降 hsa-miR-181a-3p 、hsa-miR-181a-2-3p 、hsa-miR-181b-5p 、 低OPN 表达而抑制肝癌细胞的黏附、侵袭和转移等功能。 hsa-miR-181b-3p 、hsa-miR-181c-5p 、hsa-miR-181c-3p 和 为了解OPN 在肝癌发生和发展过程中所发挥的作用，Sun hsa-miR-181d-5p ；随着研究的进展，可能还有新的成员加 等[11] 构建了3 种能调控OPN 表达的miRNA 慢病毒表达 入。这些前体序列都由1 号、9 号及19 号染色体上的基因 载体 （lenti.OPNi-1、lenti.OPNi-2 和lenti.OPNi-3 ），分别 转录加工而成，并且必须转运至细胞质内经Dicer 酶作用后， 转染过表达OPN 并具有较高转移潜力的肝癌HCCLM3 进一步加工成各自的成熟序列，才能发挥对目的基因表达 细胞，结果发现OPN 的表达量分别下降了62%、78% 和 调控的功能。它们之间的碱基序列差异甚微，功能亦相近， 95% ；而这3 种慢病毒介导的前体miRNA （lenti.OPNi-1、 常成簇排列在染色体上，协同表达，协同发挥功能。 lenti.OPNi-2 和lenti.OPNi-3 ）序列不同于miR-181a，说明 在肝细胞癌中可能还存在其他可调控OPN 表达的miRNA 。 2　MiRNA -181 家族的作用靶标 J i 等[12] 在对肝细胞癌干细胞的研究中发现，miR-181 家族成员 （miR-181a、miR-1