慢病毒，腺病毒，逆转录病毒三种病毒表达系统的区别.docxVIP

慢病毒，腺病毒，逆转录病毒三种病毒表达系统的区别慢病毒表达系统一种很常用的哺乳动物病毒表达系统；慢病毒感染宿主细胞时，可将携带的外源基因随机、稳定地整合入宿主细胞基因组中，实现目的基因稳定、长期的表达，非常适合于基因过表达稳定细胞株的建立和RNAi研究。腺病毒表达系统一种很常用的哺乳动物病毒表达系统；但与慢病毒不同的是，腺病毒基因组及其携带的外源基因不会整合入宿主细胞的基因组中，而是游离于宿主基因组外独立表达，因此可实现目的基因瞬时、高丰度的表达，同时还避免了因整合而引发的潜在的基因突变和随机效应，安全性和可控性高。逆转录病毒表达系统逆转录病毒将自身基因组及其携带的外源基因随机、稳定地整合入宿主细胞基因组中，可实现目的基因稳定、长期的表达逆转录病毒表达系统根据不同的包装细胞系可分为单嗜性、双嗜性和泛嗜性，不同包装细胞产生的逆转录病毒能够特异性地感染某一个或某一类宿主细胞。辉骏生物采用的病毒包装细胞系为plat E细胞系，该细胞系包含gag、pol和env基因，因此转染单一表达质粒就可以包装出逆转录病毒，但是该病毒具有很强的针对性，只适用于大鼠、小鼠细胞稳定株的建立。三种病毒表达系统的特点?慢病毒表达系统腺病毒表达系统逆转录病毒表达系统病毒基因组RNADNARNA病毒原型人类免疫缺陷I型病毒(HIV)人5型腺病毒(Ad5)莫洛尼鼠白血病病毒(MMLV)载体系统1个表达质粒和3个包装质粒1个穿梭质粒和1个辅助质粒1个表达质粒包装细胞293T细胞293细胞plat E细胞包装方式表达质粒与辅助质粒共转染包装细胞获得重组慢病毒颗粒；包装细胞不裂解，病毒被分泌至上清中表达质粒与辅助质粒共转染包装细胞获得重组腺病毒颗粒；病毒感染后包装细胞发生裂解。表达质粒转染含所有必需蛋白的包装细胞即可获得重组病毒颗粒；包装细胞不裂解，病毒被分泌至上清中宿主细胞分裂和非分裂的哺乳动物细胞分裂和非分裂的哺乳动物细胞分裂的大鼠、小鼠细胞动物模型可获得转基因动物，效果好不能得到转基因动物可以实现，但较有难度是否整合整合型非整合型整合型表达丰度高水平表达高水平表达高水平表达表达时间慢(2~4天)快(1~2天)快(1~2天)病毒滴度1×108~1×1010?TU/mL1×1011~1×1013?vp1×106~1×107?TU/mL克隆容量最高可达6kb的外源片段高达8kb的外源片段不超过6kb的外源片段免疫原性低高低过表达microRNA特别适合适合不适合RNAi特别适合适合适合