研究创新型试验项目计划.DOC

生命科学学院 本科生能力提高项目（科研训练）基金 子课题概要 申请类别： 指南项目□ √ 开放项目□ 课题名称：基于蛋白点杂交技术的包虫病快速检测试剂盒的研制 教师姓名： 王志钢 研究方向： 微生物 合作指导教师： 邢万金 拟接收本科生年级和人数： 05级（3人）、06级（1人） 研究项目介绍 背景知识简介 （或训练内容） 细粒棘球蚴病(echinooocoosis) 又称囊性包虫病(cysticechinooocoosis，CE)是所由棘球属续绦期幼虫寄生于人体和动物引的一类重要的、有地方流行性的人畜共患性寄生虫病，呈世界性分布。人的主要感染途径是通过消化道摄入虫卵, 多寄生于肝脏。在我国主要分布于西部和北部的内蒙古、新疆、甘肃、宁夏、青海、四川和西藏等地[1]。2000年召开的我国西部地区寄生虫专业会议上，CE被确认为危害西部地区发展和人民健康最严重的寄生虫病。内蒙古地区1990-1992年调查绵羊棘球蚴平均感染率为14.92%；1991-1995年设点检测3982人，结果表明血清学平均阳性9.82%，且历年病例呈增多趋势[4]。 目前在全球范围内，棘球蚴病的误诊率较高，主要是由于细粒棘球蚴组织结构和抗原表现很复杂。现在最常用的血清学诊断抗原是棘球蚴囊液, 但粗制的棘球蚴囊液抗原与其他蠕虫病患者血清有严重的交叉反应和非特异性反应，因此假阳性问题难以克服，诊断特异性不理想[2]。 在已鉴定的棘球蚴特异抗原中，Ag5和抗原AgB 是2个在早期研究过程中发现的特异性较强的抗原蛋白，但后来试验证明Ag5与囊尾蚴和某些肠道线虫有交叉反应。目前公认AgB 是具有诊断价值的囊液蛋白, 免疫印迹显示其最小亚基(8 kD) 可用于棘球蚴病患者血清抗体的检测[1，2]。 近来的研究表明，AgB是由一个基因家族编码的耐热脂蛋白，至少包括三个基因，其中AgB8已获得两个cDNA克隆和序列，按报道顺序分别称为AgB8/1基因和AgB8/2基因。比较这两个基因的结构显示，AgB8/1基因序列为331bp，有243bp开放阅读框；AgB8/2基因基因序列为393bp，有270bp开放阅读框[2]。Virginio等对6六种不同的重组抗原基因AgB8/1、AgB8/2、Eg-CMDHC、Eg-caBP2、Eg-AFFPf和Eg-AFFPt在大肠埃希杆菌中表达得到的重组融合蛋白,用ELISA检测：rAgB8/2的敏感性为93%，特异性为99%；结果提示rAgB8/2是具有诊断意义的重组蛋白[5]。 Lightowlers等从羊细粒棘球绦虫（新西兰株）六钩蚴cDNA文库中筛选得到Eg95cDNA,编码153个氨基酸，分子质量为16.5KDa[7]。EG95被认为是目前最具有免疫保护性的细粒棘球蚴候选疫苗，是具有免疫诊断价值的特异性抗原。 细粒棘球蚴存在地理株差异已为许多研究所证实[2,6]。我们拟通过克隆细粒棘球蚴内蒙株的AgB8/2基因和Eg95基因，进行原核表达，纯化蛋白作为检测用特异性抗原，根据免疫学原理建立快速检测方法。以EG95作为初筛抗原，以AgB8/2为复检，研制具有临床使用价值的包虫病快速诊断试剂盒。 参考文献： 王昌源，陈雅.棘球蚴分子生物学研究现状.中国人兽共患病杂志,2002,18(2)：98-101. 潘卫庆 汤林华. 分子寄生虫学.上海：上海科学技术出版社，2004.345-368. 江莉 ，冯正，许学年.细粒棘球蚴AgB亚单位抗原基因的克隆和表达系统的优化.. 热带医学杂志，2007,1672—3619. 蒋次鹏.我国包虫病流行近况.地方病通报，2002，17(3):77一79. Virginio VG,Hernandez A,Rott MB,et al.A set of recombinant antigens from Echinococcus granulosus with potential for use in the immunodiagnosia of human cystic hydatid disease.Clinical Experimental Immunology,2003,132(2):309-315. Chow C,Gauci CG,Cowman AF,et al.A gene family expressing a host-protective antigen of Echinococcus granulosus.Mol Biochem P