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动物组织细胞玻璃化冻存方法的研究进展 Vol_23No.2 Mar.20o7 科技通报 BULLETINOFSCIENCEANDTECHNOLOGY 第23卷第2期 20o7年3月 动物组织细胞玻璃化冻存方法的研究进展 杨琼霞,张绍志,俞雅芳,胡军祥 (1.浙江林学院林业与生物技术学院,浙江l临安311300;2.浙江大学制冷与低温研究所,杭州310027) 摘要:动物组织细胞的玻璃化冻存是一项新的深低温冷冻保存方法,已成功地冻存了多种动物细胞, 具有较高的实际应用和研究价值.本文论述几种主要组织细胞玻璃化冻存方法的研究及其进展,如小 鼠胰岛和卵母细胞,大鼠卵巢,牛胚泡,牛卵母细胞,猪胚胎,人胚胎等,不同冷冻保护剂,玻璃化溶液和 冷冻程序对细胞存活率的影响.并提出了玻璃化冻存动物以及组织细胞的问题与展望. 关键词:动物生理学;细胞;玻璃化;冷冻保存;组织 中图分类号:Q955文献标识码:A文章编号:lOOl-7119(2007)02—0202—05 AdvancesinCry0preservati0nofAnimalTissuesandCellsbyVitrification YANGQiong-xia,ZHANGShao-zhi2,YUVa-fangI,HUJun—xiang f1.CollegeofForestryandBiotechnology,ZhejiangForestryUniversity,tjnan311300,China 2.Refrigerationamp;CryonicEngineeringInstitute,ZhejiangUniversity,Hangzhou310027,China) Abstract:Thevitrifiedcryopreservationofanimaltissuesandcellsisanewultra—lowtemperaturefreezingmethod,sev— eralanimaltissuesandhumanembryoshavebeensuccessfullycryopreserved,thismethodwillbeofgreatvaluetoappli— cationandresearch.Thispapersummarizestheresearchprogressinvitrifiedcryopreservationofseveralanimaltissues andcells,forexample,pancreaticisletandoocytesofmouse,ovariesofrat,blastocystsandoocytesofbovine,embryosof pigandhuman,andtheeffectofdifferentcryoprotectants,vitrificationsolutionsandcoolingproceduresonsurvivalrate. Thequestionandprospectofvitrifiedcryopreservationonanimaltissuesandcellsaresuggested. Keywords:animalphysiology;cells;vitrification;cryopreservation;tissues 生物材料的玻璃化冻存技术是目前低温生 物学和低温医学研究的重要内容.1985年Rau 和Fahy采用高浓度的混合多元保护剂组成的玻 璃化溶液(VS1).以较快的降温速率使小鼠胚胎 玻璃化冻存获得成功【-1.之后.人们用玻璃化方法 成功地冻存了哺乳动物的卵母细胞,精子,胰岛, 胚胎神经细胞以及各个阶段的胚泡等. 玻璃化是指在降温过程中.不产生冰晶.而 使溶液固化的过程.它与常见的液体变晶体或部 分结晶的冻结过程不同.玻璃态固体分子间的的 作用和液态相比无明显的变化.玻璃态物质与液 体同属于近程有序.远程无序的结构.而且比 收稿日期:2006一O1—04 基金项目:浙江省自然科学基金资助项目(Y304053),国家自然科学基金资助项目 作者简介:杨琼霞(1982一),女,浙江宁波人,硕士研究生,主要从事动物生理学和低温生物学的研究. 通讯作者:胡军祥,教授,博士,E?mail:hjxy@hzcnc.corn 第2期动物组织细胞玻璃化冻存方法的研究进展203 液体近程有序程度更高【2】.玻璃化冻存就是利 用高浓度的低温保护剂组成玻璃化溶液.使其溶 质与水分子发生水合作用,增加溶液的粘稠度. 降低降温过程中冰晶的形成速度,从而使细胞在 急剧降温的过程得到保护.它使细胞在冷冻和解 冻过程中所受到的溶质损伤和机械损伤降到最 低,大大地提高了细胞冷冻保存后的存活率.