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细胞化学 （Cytochemistry ） 细胞化学技术 组织化学或细胞化学染色（histochemical or cytochemical staining ）是利用染色剂可同细胞的某种 成分发生反应而着色的原理，对某种成分进行定性或 定位研究的技术。 利用这种方法对细胞的各种成分几乎都能显示，包括 有无机物、醛、蛋白质、糖类、脂类、核酸、酶等。  细胞化学技术是在保持细胞原有形态，结构基础上， 利用已知的化学反应，原位显示细胞内某些化学成 分，通过显微镜进行定位、定性、定量分析的方法。  借助这一技术可以直接观察到细胞的形态特征、化 学成分、化学性质，揭示在不同条件和状态下的细 胞形态，化学和功能的综合变化，对疾病和细胞损 伤进行诊断、鉴别、分类及预后。与有机染料相比， 细胞化学技术更具有特异性，效果稳定，费用较低， 即使在免疫细胞化学流行的今天，也仍不失为有效 的研究技术。 研究基本要求 一、保持细胞原有结构 二、保持细胞内的原有化学成分和酶活性 三、采用的方法可靠可信，并具有高度特异性 四、反应形成的物质能在电镜和光镜下被观察到 固定 目的是将细胞的结构和化学物质双重地保存下来，固 定细胞的方法有： 1. 物理固定：如血膜空气快速干燥、冷冻干燥或直接 冷冻切片。 2. 化学固定：如甲醇、乙醇、丙酮、甲醛、戊二醛和 锇酸等试剂均能对细胞结构和其中的某些化学物质加 以固定保存。不同化学试剂所保存的化学成分、对酶 活性的影响、保存结构的细腻度均不相同。因此，要 根据实验要求和组化反应，选择最佳的固定方法和固 定剂。如显示多糖常用乙醇固定，而显示酶类多用甲 醛－丙酮缓冲液固定。 显示方法 1. 金属沉淀法：利用金属化合物在反应过程中生成有 色沉淀，借以辨认所检查的物质或酶活性。如磷酸酶 分解磷酸酯底物后，反应产物最终生成CoS或PbS有色 沉淀，而显示出酶活性。 2. 偶氮偶联法：酚类化合物与偶氮染料结合后可以形 成耐晒染料。 3. Schiff反应：细胞中的醛基可使Schiff试剂中的无色 品红变为红色。这种反应通常用于显示糖和脱氧核糖 核酸（Feulgen反应）。 4. 联苯胺反应：过氧化物酶分解H O ，产生新生氧， 2 2 后者再将无色的联苯胺氧化成联苯胺蓝，进而变成棕 色化合物。 5. 普鲁士蓝反应：三价铁与酸性亚铁氰化钾作用，形 成普鲁士蓝。 6. Formazane反应：显示脱氢酶。 7. “Nadi”反应（二甲基对苯二胺与a-萘酚反应 ）：显 示细胞色素氧化酶，呈紫色 。 8. 脂溶染色法：借苏丹染料溶于脂类而使脂类显色。 9. 茚三酮反应：显示蛋白质。 10. 纳米粒子细胞染色：金超微粒(3-40 nm)与预先精 制的抗体或单克隆抗体混合。 酶类显示： 细胞内含有多种酶，每一种酶可催化一定的化学反 应。酶的显示法是通过显示酶的活性来表明酶的存 在，而不是酶的本身。将具有酶活性的组织放人含 有一定底物的溶液中孵育，底物经酶的作用形成初 级反应产物，它再与某种捕捉剂相反应，形成显微 镜下可视性沉淀，即最终反应产物。 一、碱性磷酸酶  原理： 碱性磷酸酶是溶酶体的特征性酶，故常用此法对 溶酶体进行研究。 碱性磷酸酶在酸性条件下分解β甘油磷酸钠，释 放出的磷酸根与醋酸铅的醋酸根置换，形成磷酸 铅，后者与硫化胺作用，最终形成棕黑色的硫化 铅沉淀物，镜下清晰可辨。 镁离子可促进该酶的活性。 材料 一、巴比妥－醋酸缓冲液（pH4.8 ）可先配置储备液， 用前再配成工作液 储备液：醋酸钠0.97g、巴比妥钠1.47g，加蒸馏水至50ml 。 工作液：储备液5 ml，加8.5%NaCl 2 ml、0.1 mol/L HCl 10 ml、蒸馏水8 ml 。 二、巴比妥钠－醋酸铅工作液（按序加入下列溶液） 巴比妥钠－醋酸工作液12 ml，3.3%醋酸铅水溶液0.38