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临床免疫学检验 细胞因子和黏附分子 Cytokine and Adhesion Molecule 李擎天 qingtianli@ 2011年5月 上海交通大学医学院 T 细胞亚群功能检测 T 细胞亚群功能检测对了解机体免疫状态和探讨免疫调 节与自身免疫性疾病和肿瘤发生的关系有重要意义。 体外检测方法： ①混合淋巴细胞培养后检测分泌上清中的相关细胞因子 水平，根据不同细胞因子的浓度，了解T细胞功能； ②淋巴细胞培养，荧光素标记单克隆抗体标记，流式细 胞仪检测培养淋巴细胞内细胞因子合成状况，了解T细 胞亚群功能； ③检测外周细胞因子水平，检测各T细胞亚群所代表的 细胞因子水平，目前最常测定Thl 和Th2细胞因子。 2011年5月 上海交通大学医学院 外周细胞因子检测 ELISA技术 高纯抗细胞因子抗体吸附塑料微孔板，特异性捕获样本 中细胞因子。 洗涤未结合物，加生物素联抗细胞因子抗体，酶标亲合 素或链亲合素。加底物，显色程度通过酶标仪测定光密 度（OD：optical density ）记录。 标准曲线 2011年5月 上海交通大学医学院 B细胞功能检测 B细胞增殖试验/溶血空斑试验/酶联免疫斑点法/体内试验 主要功能是产生各类抗体。临床上很少进行体外测定 检测血清中各类抗体的水平实际是对B 细胞的功能判定 。 2011年5月 上海交通大学医学院 B淋巴细胞的分化成熟 2011年5月 5 上海交通大学医学院 B淋巴细胞的分化成熟 2011年5月 上海交通大学医学院 B细胞亚群（ Subset ） 为异质性群体，显示不同的功能和标志，依据CD5将B细胞分为B1 和B2。 （一）B1细胞： CD5 +，主要识别非蛋白质抗原，如细菌脂多糖。无须Th细胞辅 助，可直接介导对非胸腺依赖抗原的免疫应答，产生特异性抗体 为低亲和力，不产生免疫记忆细胞 （二）B2细胞： CD5 -，主要识别蛋白质抗原 在Th细胞辅助下，被完全激活并介导对 胸腺依赖抗原的免疫应答，产生特异性 抗体 2011年5月 7 上海交通大学医学院 溶血空斑试验 PBMC、SPA 致敏羊红细胞、抗人Ig抗体及补体琼脂糖 内混合，37℃温育3～5小时。抗人IgG抗体Fc段与 SPA-SRBC 结合，细胞分泌IgG与抗人IgG结合，活化 补体，介导SPA-SRBC 的溶解。 抗体形成细胞周围的SRBC溶解，形成肉眼可见溶血空 斑。每空斑表示一个抗体形成细胞，空斑大小表示产生 抗体多少。特异性高，筛选力强，直接观察，判定免疫 功能指标，免疫应答动力学变化，抗体种类及亚类研究。 2011年5月 上海交通大学医学院 B细胞产生抗体能力的测定 丝裂原诱导多克隆性抗体产生能力测定 人B细胞具有PWM受体，在体外受PWM刺激发生多克隆激活， 产生抗体。 B细胞产生抗体的能力可用ELISA测定上清液中的抗体估 计，也可用ELISPOT方法测定产生抗体的B细胞数量。 方法 1.分离PBMC。