梨组织样本gc-ms代谢组学检测分析方案.pdfVIP

梨组织样本 GC-MS 代谢组学检测分析方案 一、项目简介 1.1 项目背景 梨(Pyrus spp)，营养丰富，含有多种维生素和纤维素，具有重要的经济价 值和营养价值，但由于食品储存、运输乃至加工过程中酶促褐变，导致了产品感 观、风味和品质下降。因此了解食品褐变的反应机理，寻找控制褐变的途径有着 重要的实际意义。酶促褐变(enzymatic browning): 是在有氧的条件下，酚酶催 化酚类物质形成醌及其聚合物的反应过程。 植物组织中含有酚类物质，在完整 的细胞中作为呼吸传递物质，在酚-醌中保持着动态平衡，当细胞组织被破坏后， 氧就大量侵入，造成醌的形成和其还原反应之间的不平衡，于是发生了醌的积累， 醌再进一步氧化聚合，就形成了褐色色素。因此，果实褐变发生变化可能与黄酮 物质和酚酸物质的积累变化相关。 1.2 研究目的 控制梨的酶促褐变是保证其品质和保持良好观感的重要手段，本实验中通过 技术手段以减少梨的酶促褐变。意图通过代谢组学的手段检测出在不同处理条件 下酶促褐变对于样本中代谢物的含量的影响，在代谢组水平上，解析处理减少酶 促褐变对于梨代谢物差异积累；解析出不同处理条件下营养物质的变化情况；解 析出处理减少酶促褐变的代谢机制。 1.3 实验分组 合理的取样方案是后续开展实验和数据分析的基础。在本方案中，以成熟梨 果实为取样对象，取果肉进行实验处理，处理方案如下： 2 种处理方式*2 个取样时间点*10 个生物学重复=40 个样本。 采样时间 对照组 处理组 时间点1 A B 时间点2 C D 1 / 14 取样说明： 1. 取果实组织，挑选长势一致的植株材料。 2. 取样时，为了保证样品的准确性和减少系统误差，每份样品选取3株以上 （有条件最好6株以上）样品混样，作为一份样品。 3. 每份样品至少3个重复，达到生物学重复要求。 4. 鲜重3-5g （干重不低于1g）。 5. 取完新鲜样品快速装入钻有10个1-2mm小孔的15ml取样管中，将样品立即 放人液氮速冻2min，之后-80℃保存，干冰运输，不能反复冻融。 1.4 技术分析方案 非靶向代谢组学又称为发现代谢组学，主要是将对照组和实验组的代谢组 （某一生物体的全部代谢物）进行比对，以找出其代谢物的差异。代谢组学研 究通过一定的手段能够帮助研究员从代谢产物海中跳出来，提供一个“航拍”的 视角，一目了然地发现差异性代谢产物。然后通过已知的代谢通路逆推找出调 节酶和基因，完成物质变化机制、生理特征解释等方面的研究。目前常用质谱 技术对比情况如下： 技术 四级杆 飞行时间 四级杆飞行时 离子阱 (Q-MS) (TOF -MS) 间(QTOF-MS) (TRAP -MS) 准确率 0.01% 0.02到0.2% 0.001% 0.01% (100ppm) (200ppm) (10ppm) (100ppm) 分辨率 4000 8000 10000 4000 m/z范围 4000 300,000 10,000 4000 扫描速度 秒 千分之一秒 秒 秒 优势 1.成本低； 1.定性能力强； 1. 能够提供 1.成本低廉 2.定量能力强； 2.速度快； 高分辨谱图； 2.可多级串联； 3.质量上限高 2.定性能力