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嗜肺军团菌ip基因的克隆及其原核表达
30 6
·696 · Journal of Ningxia Medical College 2008 12
:1005-8486(2008)06-0696-04
··
ip
杨志伟, 曹秀琴
(, 750004)
:目的 ip , pET-ip , 。方法
(PCR), DNA ip ,
pET-32a(+), pET- ip , 、PCR
, BL21, IPTG , SDS、。结果
792 bp ip , pET- ip 49 kDa Trx-IP ,Wester -
blot 。结论 ip ,
。
:;ip ;;
:R378 :A
, L1BCYE-a , 37℃5 d ,
[2]
, , DNA 。 ip
。, [1]
, ip , 5
, , Hi d ⅢBamHⅠ, :
。 ip ip (P1):5′-GGAAGATCTAAGCTT ATGGGAG-
[1]
29kDa (29 kDa immu oge ic protei , IP), GTTCAATGAG -3′,
1～ 10 , , ip (P2 ): 5′- TTAATAAGC GGATCC
。 TTACCAGGCTGGTATTG- 3′。
B 、T , , ip 50 μL PCR :Ex Taq premix 25 μL, Primer
DNA 。PCR P1(50 pmol/L)1μL, Primer P2(50 pmol/L)1μL, DNA 1
ip , pET-32a μL, 22 μL。PCR , 1 μL
(+), pET-ip , , ip DNA 。 :94 ℃
, IP 、 5 mi ;94 ℃30 s, 52℃45 s,72℃60 s, 30
。 ;72℃5 mi 。3 μL ,
1 1.0%。
1.1 1.2.2 pET-ip
L1 Hi d Ⅲ BamHⅠ PCR ip
。 pET-32a(+), T4 DNA
DH5a, pET-32a(+); 16 ℃, 200 μL DH5a, 37℃,
Hi d Ⅲ BamH Ⅰ TOYOBO, NEB T4DNA 5 mL (60 mg/L)LB
, IgG , ,
(H+L) DAB
P1、P2 PCR Hi d Ⅲ
。 BamHⅠ 、。
1.2
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