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微生物复习资料 一、绪论 1、十九世纪哪两个焦点问题的争论促使了微生物学的诞生？ 答：问题一：微生物能不能自发产生 问题二：传染病的性质是什么 2、Pasteur 是设计怎么的实验来否定“自然发生学说”？ 答：巴斯德实验： 巴斯德将营养液(如肉汤)装入带有弯曲细管的瓶中，弯管是开口的，空气可无阻地进入瓶中，而空气中的微生物则被阻而沉积于弯管底部，不能进入瓶中。巴斯德将瓶中液体煮沸，使液体中的微生物全被杀死，然后放冷静置，结果瓶中不发生微生物。 此时如将曲颈管打断，使外界空气不经“沉淀处理”而直接进入营养液中，不久营养液中就出现微生物了。可见微生物不是从营养液中自然发生的，而是来自空气中原已存在的微生物。1864年巴斯德在法国国家科学院报告了他的工作。原定和他辩论的有名的自然发生论者F．A． 巴斯德实验意义 巴斯德通过试验证实酒和醋的酿造过程实际上是微生物发酵的过程，而且认为不同发酵是由不同种类微生物所引起的，酒精发酵是有酵母菌引起的，乳酸发酵、醋酸发酵和丁酸发酵都是由不同的细菌所引起的。 意义： （1）发现并证实发酵是由微生物引起的 （2）彻底否定“自然发生”学说 （3）为免疫学提供理论（预防接种） 3、什么是柯赫法则？ 答：柯赫法则是德国科学家柯赫(Koch)(1843-1940)根据自己的工作经验以及他的前辈Henle的观点提出的一套科学验证方法,成功地验证了细菌与病害的关系；其内容为： 1、在每一病例中都出现这种微生物 2、能从寄主分离出这样的微生物并在培养基中培养出来 3、用这种微生物的纯培养接种健康而敏感的寄主，同样的疾病会重复发生 4、从试验发病的寄主中能再度分离培养出这种微生物来 二、实验技术 1、提高显微镜分辨率的措施？ 答： 利用油镜可提高显微镜分辨率。 油镜的工作原理：在显微镜的光学系统中，物镜的性能最为重要。普通光学显微镜通常配置有几个物镜，可分为干燥系和油浸系两种物镜。干燥系物镜与标本之间的介质是空气，而油浸系物镜与标本之间的介质是香柏油。 若玻片与物镜之间的介质为空气，则当光线通过玻片后发生曲折，产生散射现象，进入物镜的光线显然减少，这样就降低了视野的照明度；反之，若玻片与物镜之间的介质为香柏油，当光线通过载玻片后，可直接通过香柏油进入物镜而不发生折射。 油镜的放大倍数最大，对微生物研究最为重要。利用油镜不但能增加照明度，更主要是能增加数值口径（N.A），也增加显微镜的分辨率。 2、微生物纯种培养的方法？ 答：（1）培养基的配制和灭菌技术 培养基：是将微生物生长繁殖所需要的各种营养物质，用人工的方法配制而成的用于培养微生物的营养基质。 分类： 1.按来源分类 天然培养基 合成培养基 半合成培养基 2.按特殊用途分类 加富培养基 选择培养基 鉴别培养基 3.按物理状态分类 固体培养基 液体培养基 半固体培养基 灭菌：是指杀死或消灭所有微生物，包括营养体、孢子和芽孢。 消毒：一般是指消灭有害微生物的营养体和病原菌。 培养基的配制方法： 1.按照配方的组分及用量先分别称量并配成液体。 2 .根据要求调到一定的酸碱度(pH)。 3.若制成固体培养基则加入2％琼脂并加热融化。 4.根据需要的数量分装入试管或三角瓶中，加上棉塞或盖上纱布。 5.包扎好灭菌后备用 培养基及常用器皿的灭菌： 1.棉塞制作与器皿包扎 棉塞起过滤的作用，只能让空气透过，而空气中的微生物则不能通过。 制作棉塞应采用普通未脱脂的棉花，医用脱脂棉会吸水，不宜采用。 用牛皮纸包扎棉花塞部分，防止水蒸气弄湿。 2.培养基与器皿的高压蒸汽灭菌 一般培养基常用0.1MPa，约120℃维持15～20min，便可达到彻底灭菌的目的。 优点：时间短，灭菌效果好。可以杀死所有的微生物，包括最耐热的细菌芽孢及其他休眠体。 注意：灭菌的因素是高温而不是高压，故灭菌锅内的冷空气要彻底排除，否则，压力虽然达到0.1MPa，但温度并没有达到要求 3.玻璃器皿的干热灭菌 比湿热灭菌法所需的温度要高些(150～170℃)，时间也要长些(1～2h)，且包扎器皿的纸或棉塞容易烧焦。 （2）无菌操作技术 目的：防止纯培养物被其他微生物所污染。 1.无菌环境条件：无菌环境是指在无菌室、无菌箱、超净工作室或超净工作台等无菌或相对无菌的环境条件下进行操作。 2.无菌操作接种技术：接种时，关键是要严格进行正确的无菌操作，其要点是要充分利用酒精灯焰周围的高温区(无菌区)，即接种时，管口和瓶口始终保持在火焰(如酒精灯焰)旁边，进行熟练的移接种操作，以便保证