核移植与动物克隆4、组织工程5、细胞治疗1.pptVIP

生物反应器 bioreactor used to engineer functional tissues * * 第十章 细胞工程 cell engineering 细胞工程（cell engineering） 应用细胞生物学和分子生物学方法，在细胞水平上进行的遗传操作，其目的是改造遗传性状，获得细胞产品、药品或医用生物材料的综合技术。 目前生物工程所涉及的主要方面 基因工程 酶工程 发酵工程 蛋白质工程 细胞工程? 微生物细胞工程 植物细胞工程 动物细胞工程 现代生物工程 动物细胞工程所涉及到的研究领域 1、生产医用蛋白 2、生产基因工程动物 3、核移植与动物克隆 4、组织工程 5、细胞治疗 1、生产医用蛋白 单克隆抗体的生产 -----B 淋巴细胞杂交瘤技术 复杂的人体蛋白的生产 -----真核细胞表达体系（CHO细胞） 组织型纤溶酶原激活剂（tPA） 凝血因子Ⅷ 促红细胞生成素 单克隆抗体的生产 CHO细胞 2、生产基因工程动物 正 常 动 物 基 因 组 引入病毒基因组 模拟病毒性疾病的发病过程，进行药物有害型和有效性评价 引入药用蛋白基因 生产药用蛋白 引入靶DNA 研究诱变剂的作用机制 (1) 转基因动物 表达绿色莹光蛋白（GFP）基因的转基因小鼠 组织特异性表达报告基因LacZ的转基因小鼠 超级小鼠（supermouse） 将外源DNA注射入受精卵的雄原核内 Micromanipulator system for transgene 去除特定的内源基因 （2）基因剔除（Knockout）小鼠 正 常 动 物 基 因 组 研究相应的功能丧失 定时定点去除特定的内源基因 建立特定基因缺陷型小鼠品系，作为医药研究的动物模型 Knockout小鼠建立过程 Nup155基因剔除小鼠 （3）基因替换（Knockin)小鼠 Myf5 +/+ Myf5-/- MygKi/ Myg5 美国麻省理工学院Jaenisch实验室 （用肌细胞生成素基因（ MygKi ）替代Myf5基因） 3、核移植与动物克隆 核移植：取核（A/B）---移入新核（C/D） 核移植与动物克隆过程 ● 1938年Spemann”细胞核全能”将发育到后期胚胎取出细胞核,移植到卵 ● 1952年Briggs和T.J.King为证实两栖类胚胎发育早期细胞核的全能性,将发育到 后期青蛙胚胎细胞核取出,移植到青蛙卵子中,但细胞核未继续发育. ● 1970年Gurdon为证明两栖类成熟体细胞全能性,将非洲爪蟾成熟体细胞核取出移植到卵中,得到了发育正常的蝌蚪,但在开始进食后死亡. ● 1981年,Illmensee和Hoppe将小鼠胚胎泡内细胞团的细胞核移植到去核受精卵中克隆出三只小鼠, ● 1982年詹姆斯.麦格拉思和达沃尔.泽尔特无法重复上述实验,得出结论:一旦小鼠的胚胎发育到双细胞阶段,就不能克隆.得到另外学者的证实. ● 1984年Willadsen用羊的未成熟胚胎细胞克隆出一只活的产羊,其它人用他的方法在牛、猪、山羊、兔和猕猴等动物身上进行了重复实验。 ● 1994年First利用发育到晚期阶段胚胎细胞（至少有120个细胞）克隆牛 ● 1996年伊恩.威尔穆特(I.Wilmut)利用菲尔斯方法,在细胞核植入羊卵子前,让胚胎细胞处于休眠状态,植入细胞核卵子发育成正常的胚胎,发育成羊 ● 1997年伊恩.威尔穆特(I.Wilmut)利用取自一只6岁成年羊的乳腺细胞培养成功一只克隆羊. 克隆动物研究大事记 胡以平教授和转基因羊 人类治疗性克隆 human therapeutic cloning Cell Research (2003); 13(4):251-263 Embryonic stem cells generated by nuclear transfer of human somatic nuclei into rabbit oocytes Ying CHEN1, 2, Zhi Xu HE3, Ailian LIU1, 2, Kai WANG1, 2, Wen Wei MAO1, 2, Jian Xin CHU1, 2, Yong LU1, 2, Zheng Fu FANG1, 2, Ying Tang SHI1, 2, Qing Zhang YANG1, 2, Da Yuan CHEN4, Min Kang WANG4, Jin Song LI4, Shao Liang HUANG3, Xiang Yin KONG5, Yao Zhou SHI5, Zhi Qiang WANG5, Jia Hui XIA6, Zhi Gao LONG6, Zhi Gang XUE6, Wen