培养基适用性 SOP.docVIP

文件名称 培养基适用性检查标准操作规程 文件编码 SOP-QC-1015-03 页数 共 页 颁发部门 GMP办公室 QA 年 月 日 修 订 年 月 日 批 准 年 月 日 审 核 年 月 日 生效日期 年 月 日 分发部门 质管部 起草说明 新增文件，直接升级为03版。 目 的 制定培养基适用性检查标准操作规程。 范 围 本规程适用于微生物培养基适用性测定。 责 任 人 文件起草、审核、签批、使用、归档、保管人员。 执行标准 《中国药典》2010版一部附录ⅩⅢ 培训对象 检验人员、QC主管 内 容 1. 计数培养基的适用性检查 1.1 适用范围 细菌、霉菌及酵母菌计数用的培养基应进行培养基的适用性，成品培养基、由脱水培养基或按处方配置的培养基均应检查。 菌种 试验用菌株的传代数不得超过5代（从菌种保藏中心获得的冷冻干燥菌种为第0代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特征。 菌种 编号 大肠埃希菌 CMCC(B)44102 金黄色葡萄球菌 CMCC(B)26003 枯草芽孢杆菌 CMCC(B)63501 白色念珠菌 CMCC(F)98001 黑曲霉 CMCC(F)98003 菌液的制备 试验菌株 培养物的制备 培养 菌悬液的制备 大肠埃希菌 分别接种新鲜培养物至营养肉汤培养基中或营养琼脂培养上。 30~35℃18~24小时 分别取制备好的培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制备成每1ml含菌数为50~100cfu的菌悬液。 金黄色葡萄球菌 枯草芽孢杆菌 白色念珠菌 接种新鲜培养物至改良马丁培养基或改良马丁琼脂培养基上。 23~28℃24~48小时 黑曲霉 接种新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基上。 23~28℃5~7天 加入3~5ml含0.05%（ml/ml）聚山梨酯的80的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后，采用滴管吸出孢子菌液至无菌试管内，用含0.05%（ml/ml）聚山梨酯的80的0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数为50~100cfu的菌悬液。 菌液制备后若在室温下放置，应在2小时内使用；若保存在2~8℃，可在24小时内使用。黑曲霉孢子悬液可保存在2~8℃，在验证过的贮存期内使用 适用性检查 被检培养基 试验菌株 制备过程 培养 营养琼脂培养基 大肠埃希菌 分别取各试验菌悬液1ml(50~100cfu),分别注入无菌平皿中，立即注入营养琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个皿，混匀，凝固。 同时，用对照培养基（营养琼脂培养基）代替被检培养基进行上述试验。 30~35℃ 48小时 金黄色葡萄球菌 枯草芽孢杆菌 玫瑰红钠琼脂培养基 白色念珠菌 分别取各试验菌悬液1ml(50~100cfu)，分别注入无菌平皿中，立即倾注玫瑰红钠琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固。 同时，用对照培养基（玫瑰红钠琼脂培养基）代替被检培养基进行上述试验。 23~28℃ 72小时 黑曲霉 酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基 白色念珠菌 取试验菌悬液1ml(50~100cfu)，分别注入无菌平皿中，立即倾注酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固。 同时，用对照培养基（酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基）代替被检培养基进行上述试验。 23~28℃ 72小时 结果判定 若被检培养基上的菌落平均数不小于对照培养基的菌落平均数的70%，且菌落形态大小与对照培养基上的菌落一致，判该培养基的适用性检查符合规定。 控制菌检查用培养基的适用性检查 2.1 适用范围 控制菌检查用的培养基应进行培养基的适用性检查，成品培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均应检查。 2.2 菌种 试验用菌株的传代数不得超过5代（从菌种保藏中心获得的冷冻干燥菌种为第0代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特征。 菌种 编号 大肠埃希菌 CMCC(B)44102 金黄色葡萄球菌 CMCC(B)26003 乙型副伤寒沙门菌 CMCC(B)50094 铜绿假单胞菌 CMCC(B)10104 生孢梭菌 CMCC(B)64941 白色念珠菌 CMCC(F)98001 菌液制备 试验菌株 培养物的制备 培养 菌悬液的制备 大肠埃希菌 分别接种新鲜培养物至营养肉汤培养基中或营养琼脂培养上。 30~35℃18~24小时 分别取制备好的培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制备成含菌数为50~100cfu/ml的菌悬液。 金黄色葡