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美国Pickering柱后衍生仪-麻痹贝类毒素检测AOAC方法
双壳软体动物中麻痹贝类毒素的分析
高效液相色谱柱后衍生法（荧光检测）
甲壳类水生动物毒素是一组由腰鞭毛虫所产生的18 种次级代谢产物，它们多寄存在双壳软体动物中。腰鞭毛
虫的繁盛是季节性的，多出现在温暖的月份。因为传染往往是不可预测的，所以甲壳类水生动物应定期地进行监测。
吃了被感染的动物往往会导致麻痹性或瘫痪性的中毒，直接威胁生命。
用小鼠实验来检测鞭毛虫导致的神经毒素的方法有很大的缺陷，进而探索出液相色谱的分析方法。近来液相色
谱柱后氧化衍生在碱性条件下检测此毒素的方法被批准成为AOAC 新的官方方法-OMA2011.02 。三组毒素在梯度条
件下由C18 柱分离，生成的衍生产物很容易被荧光检测器检测到。Pickering 的柱后衍生检测麻痹贝类毒素的系统方
法符合AOAC Method 2011.02 ，如下：
方法
样品准备
1. 转移5g 已均质的贝类组织到50mL 离心管中，并加入 1N 的HCL 5mL;
2. 搅拌混合物，调节PH 到2-4 必要范围；
3. 开水浴加热混合物5 分钟，冷却至室温，重新检查PH 到必要范围；
4. 离心混合物，取上清液50uL 到微离心管中；
5. 加25uL 30%三氯乙酸（TCA）脱蛋白萃取，混合，离心；
6. 1M NaOH 调节pH 到2-4；
7. 0.2um 滤膜过滤进样。
分析条件
1. 柱：C18 柱,3.5um,4.6*150mm
2. 流速：0.8ml/min
3. 流动相：A:11mM 的庚烷磺酸钠，5.5mM 的磷酸，氢氧化铵调节pH 到7.1；
B: 11mM 的庚烷磺酸钠，16.5mM 的磷酸，11.5%的乙腈，氢氧化铵调节pH 到7.1
柱后衍生条件
柱温：40℃
反应器体积：1.0mL
反应器温度：85℃
试剂流速：0.4mL/min
试剂：1. 100mM 磷酸，5mM 高碘酸，5M 氢氧化钠pH 至7.8
2 ．0.75M 硝酸
检测器：荧光检测器，λ ex ：330nm，λ em ：390nm
HPLC GRADIENT PROGRAM
TIME(MIN) %A %B
0 100 0
7.9 100 0
8 0 100
18.5 0 100
18.6 100 0
24 100 0
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