血红蛋白的提取及分离导学案.docVIP

血红蛋白的提取与分离 2、掌握血红蛋白的提取与分离的基本过程和方法。 学习重点 凝胶色谱法的原理和方法样品的预处理；色谱柱填料的处理和色谱柱的装填2、原理：许多重要的生物大分子，如 等都具有 在 下，这些基团会带上 。在电场的作用下，这些带电分子会向着与其 移动。电泳利用了待分离样品中各种分子 以及分子本身 、 的不同使带电分子产生不同的 ，从而实现样品中各种分子的分离。 3、分类： 电泳 电泳。 测定（ 蛋白质相对分子质量 ）通常用十二烷基硫酸钠（SDS）—聚丙稀酰胺凝胶电泳 蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取决于它所带静电荷的多少以及分子的大小等因素。 为了消除静电荷对迁移率的影响可以在凝胶中加入 。SDS能使蛋白质发生完全变性。由几条 肽链组成的蛋白质复合体在SDS的作用下会解聚成单条肽链，因此测定的结果只是 。SDS能与各种蛋白质形成蛋白质—SDS复合物，SDS所带负电荷的量大大超过了蛋白质分子原有电荷量。因而掩盖了不同种蛋白质间的电荷差别，使电泳迁移率完全取决于 。 血红蛋白的提取与分离 2、掌握血红蛋白的提取与分离的基本过程和方法。 学习重点 凝胶色谱法的原理和方法样品的预处理；色谱柱填料的处理和色谱柱的装填一、选择题 1、凝胶色谱分离法分离蛋白质时，凝胶的种类较多，但其作用的共同点是( ) A、改变蛋白质分子通过凝胶时的路径 B、吸附一部分蛋白质，从而影响蛋白质分子的移动速度 C、将酶或纽胞固定在凝胶中 D、与蛋白质分子进行化学反应，从而影响其移动速度 2、下列各项中，一般不影响凝胶色谱法分离蛋白质中的分离度的是 ( ) A、层析柱高 B、层析柱的直径 C、缓冲溶液 D、样品的分布 3、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳中决定蛋白质或多肽移动速度的主要因素是 ( ) A、蛋白质分子所带的电荷 B、蛋白质分子的形状 C、蛋白质分子的相对分子质量 D、缓冲溶液的pH 4、为了提取血红蛋白，从学校附近的屠宰场索取新鲜的猪血，对猪血处理的正确操作是( ) A、要在采血容器中预先加人抗凝血剂柠檬酸钠 B、取血回来后，马上进行高速长时问离心 C、将离心后的血细胞加入清水缓慢搅拌 D、重复洗涤直到上清液呈红色为止 5、下面说法不正确的是 ( ) A、在一定范围内，缓冲溶液能够抵制外界的酸和碱对溶液pH的影响，维持pH基本不变 B、缓冲溶液通常由1～2种缓冲剂溶解于水中配制而成 C、电泳是指带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程 D、透析袋能使大分子自由进出，而将小分子保留在袋内 6、蛋白质的提取和分离分为哪几步( ) A、样品处理、凝胶色谱操作、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 B、样品处理、凝胶色谱操作、纯化 C、样品处理、粗分离、纯化、纯度鉴定 D、样品处理、纯化、粗分离、纯度鉴定 7、洗涤红细胞时，离心所采用的方法是( ) A、低速长时间离心 B、低速短时间离心 C、高速长时间离心 D、高速短时间离心 二、非选择题 、科学家发现家蝇体内存在一种抗菌活性蛋白。这种蛋白质具有极强的抗菌能力，受到研究者重视。 (1)分离该抗菌蛋白可用电泳法，其原理是根据蛋白质分子的、大小及形状不同，在电场中的不同而实现分离。 (2)可用金黄色葡萄球菌来检验该蛋白的体外抗菌特性。抗菌实验所用培养基中的牛肉膏和蛋白胨主要为细菌生长提供和。 (3)分别在加入和未加入该抗菌蛋白的培养基中接种等量菌液。培养一定时间后，比较两种培养基中菌落的，确定该蛋白质的抗菌效果。 (4)细菌培养常用的接种方法有和。实验结束后，对使用过的培养基应进行 处理。 相对分子质量较小的蛋白质 相对分子质量较大的蛋白质 （1） （2） （3） （4） （5） B A 多孔板 阴极 阳极 加入待分离的样品