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植物源酯酶农药残留快速检测试纸研制及应用进展 随着社会的发展，温饱问题逐渐被食品安全和绿色食品所取代，然而，生产者为了提高产量和减少病虫害危害，化学防治仍然是当前最主要的防治方法，近30a大多数国家农药施用量增加了35%～40%[1]。过度使用农药会导致农药残留，通过生物链最终被人体吸收，这对人体的内分泌和生殖发育照成慢性毒性[2]。特别是有机氯农药，如艾氏剂、双对氯苯基三氯乙烷（DDT）和六氯环己烷（HCH），具有较强的持久性、蓄积性、毒性和环境迁移能力，从而导致了更大的危险系数[3]。因此，如何快速检测农药残留成为当前重要命题。 　目前，农药残留分析方法主要有：薄层色谱法（TLC）、气相色谱法（GC）、气相色谱-质谱法（GC-MS）、液相色谱法（HPLC）、液相色谱-质谱法（LC-MS）、超临界流体色谱（SFC）、 毛细管电泳（CE）、免疫分析（IA）。但是，上述方法需要实验专员操作，且费时费力，一般应用于实验室进行定量分析[4]；为了满足现场检测的需求，农药残留快速检测试纸的研制与开发得到重视，基于植物酯酶比动物酯酶更便宜和易保存等特点，因此开发出反应灵敏的植物源酯酶是当前研究热点。本文综述植物酯酶酶抑制发检测农药残留的工作原理、酶源、检测方法、主要应用领域等，以期进一步认识植物酯酶在农药快速检测中的研究现状。 　1 植物酯酶检测农药残留的原理 　植物酯酶抑制法，通过样品中含有的农药与酯酶反应后，显色剂同底物反应的比色原理测定农产品当中的农药残留量。具有短测量时间、高灵敏度、结果可靠和检测体系容易实现等特点。基于其比色原理，目前的测定方法有靛酚乙酯法和固蓝 B盐法等。 　1.1 固蓝B盐法检测植物酯酶的原理 　当植物酯酶遇到有机磷农药时，农药能抑制植物酯酶活性，而活性能用比色来测定，即如果样品中农药残留量很低，植物酯酶活性没有受到抑制，则反应得到的紫红色偶氮化合物的则多，显色明显；反之，如果农药残留量很高，植物酯酶的活性受到抑制，反应得到的紫红色偶氮化合物的较少，则不能显色或很少。其中显色反应方程式如下[5]： 　乙酸-alpha;-萘酯+水 萘酚+乙酸 　固蓝B盐+萘酚 紫红色偶氮化合物+氯化锌+盐酸 　1.2 2，6-二氯靛酚法检测植物酯酶的原理 　当样品中含有机磷类农药时，会抑制植物酯酶的活性，底物分解过程变慢或者不分解，溶液不变色或为浅蓝色，吸光值则较高；反之，如果农药残留量很低，植物酯酶的活性不受其影响，底物分解很快，最终颜色很蓝，吸光值则较低。因此吸光与农药残留量呈正相关。其中显色反应方程式如下[6]： 　碘化硫代胆碱 硫代胆碱 　硫代胆碱 +2，6-二氯靛酚 蓝色褪却 　2 植物源酯酶的筛选 　目前，植物源酯酶研究发展迅速，国内外陆续在不同作物不同部位中提取酯酶，大部分已经进行农药残留分析试验（表1）。 　以往研究数据表明不同作物的植物酯酶活性和灵敏度不同，且同一种作物但不同部位活性和灵敏度也不相同。且来源不同的植物酯酶对其活性的影响较明显，如植物酶源的品种、批次都会直接对检测结果的重现性产生一定影响[7]。但目前对植物酯酶的特征上和产生这种现象的机制尚不完全清楚[8]，导致植物酯酶在农药残留检测应用中受到阻碍。因此，研究植物酯酶的特性以及筛选植物源酯酶显得尤为重要。 　3 应用条件 　试纸法（速测卡法）是根据酶抑制法的原理检测农药残留，将浸渍了胆碱酯酶或其它敏感酶类的滤纸片作为检测酶片，根据试纸的颜色变化来反映酶活性受到农药抑制的程度。该方法可用肉眼直观的辨认来判定农药残留是否超标。该法操作简单、使用方便，但灵敏度较低，一般在初步筛查鉴定使用，且由试纸法检测结果的符合率超过80%[17]。在使用过程中需要注意几个问题： 　速测卡需保存于干燥的地方，冷藏保存1a，开封后7d内使用最佳； 　速测试纸可以检测有机磷和氨基甲酸酯类农药残留，但是对其它类型的农药无法检出； 　随机抽取3～4个样品，且每个样品叶片、果实、叶柄和茎也需检测； 　制样时注意更换或洗净制样工具，如剪刀、烧杯等，防止样品间交叉污染； 　浸样时间不宜过长或过短，一般5～10 min，避免假阳性的发生。总之，在检测过程中需要细致的把握每一个环节。 　4 应用前景 　植物酯酶的提取工艺是保障酯酶活性和检测灵敏度的关键；同时，纯化酯酶可以提高酶的活性；酶的固定化工艺使酶固化，有利于储存和使用，适合快速分析筛查。 　现在，已经有很多研究对植物酯酶的提取条件进行优化，刘文君等[6]通过比较底物优越性研究，结果表明2，6-二氯靛酚乙酸酯与植物酯酶反应效果更好。陈士恩等[18]通过真空冷冻浓缩，羧甲基纤维素层析，及真空冷冻干燥，提取小麦酯酶量达2.3%；吴定等[19]用70%饱和硫酸铵对小麦酯酶进行纯化，酶催化