海洋生物抗在枯草杆菌BS168中的高效表达.PDFVIP

BS168 , , , , , ( , 233030) 摘要: 为了实现基因工程高效制备tachyplesin Ⅰ, 采用tachyplesin Ⅰ基因串联表达的方法, 以穿梭表达 载体 pSBPTQ 为表达载体, 通过 RT-PCR 扩增 tachyplesin Ⅰ基因(tac) 和采用直接退火的方法合成 tachyplesin Ⅰ串联基因(2tac), 构建重组表达载体 pSBPTQ-TAC 和 pSBPTQ-2TAC, 转化到枯草杆菌 BS168 实现高效表达。实验结果表明: 基因tac 和2tac 在枯草杆菌中表达成功, TAC 和2TAC 抗菌肽表 达量分别约为 8.5 ％、15.8 ％, 经高效液相色谱分析表达产物在发酵上清液中的含量约为 5.46 、10.36 mg/L; 表达产物 TAC 和 2TAC 对大肠杆菌 K88 和金黄色葡萄球菌都具有明显的抑菌作用, 2TAC 经 BrCN 水解产物抑菌活力高于 TAC, 而 2TAC 的表达产量大约是 TAC 的 1.89 倍。这表明通过 tachyplesin Ⅰ串联表达产物降低了自身对宿主的毒性, 可以提高tachyplesin Ⅰ的表达产量。 关键词: 抗菌肽tachyplesin Ⅰ; 表达载体构建; 串联表达; 抗菌活性 中图分类号: Q786 文献标识码: A 文章编号: 1000-3096(2011)03-0055-09 (Horseshoe crab) [1], 1 材料与方法 1.1 材 料 [2] 1.1.1 tachyplesin Ⅰ, Escherichia coli. DH5α , E.coli K88(Staphyloccocus aureus) , ; Bacillus subtilis BS168 , , ; TA pUCM-T ; , , , tachyplesin Ⅰ - pSBPTQ[4] ; , , ; 1.1.2 tachyplesin Ⅰ[3] ; , GMIGMII [5]; MSR [6] cDNA , TaKaRa ; Trizol reagent Invitrogen ; , , mRNA , ,