呼吸道病毒九联检技术讲解.ppt

呼吸道病毒九联检技术 九项呼吸道感染病原体IgM抗体 采用间接免疫荧光法（IFA） 同时检测人血清中呼吸道感染主要病原体的IgM抗体 用于呼吸道感染疾病的辅助诊断。 可检的病原体包括： 嗜肺军团菌血清1型、 肺炎支原体、 Q热立克次体、 肺炎衣原体、 腺病毒、 呼吸道合胞病毒、 甲型流感病毒、 乙型流感病毒 副流感病毒1、2和3型。 .检测原理 间接免疫荧光法IFA 基于待测样本中的抗体与吸附在载玻片上的抗原发生的反应。 样本中存在的特异性抗体和抗原反应，未与抗原结合的免疫球蛋白在洗涤步骤中除去。 在下一步骤中，抗原-抗体复合物与荧光素标记的抗人球蛋白反应 用免疫荧光显微镜观察结果。 试剂盒组成及用途 简明操作程序 结果判断 有效性判断 每一次试验都应设立阳性和阴性对照，以确认试验和试剂盒的有效性。观察到的荧光模式应为： 阳性对照：腺病毒、流感病毒、呼吸道合胞病毒或副流感病毒对阳性质控的1-15%细胞出现苹果绿细胞核、胞浆或胞膜荧光（在副流感病毒和呼吸道合胞病毒中能同时观察到着色的合胞）；军团菌、衣原体或立克次体中所有的细菌呈现出苹果绿荧光；支原体对阳性质控在细胞外围呈现苹果绿色荧光。 阴性对照：军团菌、肺炎衣原体和立克次体无荧光，支原体、腺病毒、甲型和乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒和副流感病毒的细胞呈现红色。 阳性结果荧光图谱 阴性结果荧光图谱 样本结果判断 阳性结果：可以观察到腺病毒、流感病毒、呼吸道合胞病毒或副流感病毒对阳性血清的1-15%细胞的细胞核、胞浆或胞膜出现苹果绿色荧光（在副流感病毒和呼吸道合胞病毒中能同时观察到着色的合胞）；军团菌、衣原体或立克次体中所有的细菌呈现出苹果绿色荧光；支原体对阳性血清在细胞外围呈现苹果绿色荧光。 样本结果判断 阴性结果：可观察到军团菌、肺炎衣原体和立克次体无荧光，支原体、腺病毒、甲型和乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒和副流感病毒的细胞呈现红色。 临床灵敏度和特异性 对所需检测的样本要求 仅适用与于检测人血清。 其血液采集需由专业人员无菌静脉穿刺采集。建议使用消毒或无菌技术，以保持样本的完整性。 血清样本采集后如不在8小时内检测应2～8 oC冷藏，如7天内不检测，则应冷冻（-20oC）保存。 不要反复冻融以防止免疫球蛋白滴度降低，特别是IgM。 不要使用高血脂或污染的血清。若样本中含有微粒要离心使之澄清。 呼吸道感染病原体IgG/M抗体检测 在感染早期采集的样本可能是检测不到IgG的，在这种情况下可采用IgM检测，或者在14-21天后采集第二个血清样本，并与原标本同时检测来确定是否发生血清转换。 在初次感染和再次感染的过程中，IgG和IgM抗体有不同的表现方式：初次感染时，几乎在所有的情况下IgM和IgG均出现（IgM早于IgG出现）；而再次感染时，可能不出现IgM，因此IgG的检测是唯一有用的诊断方法。 在许多疾病中病人的一生都可能存在高滴度的IgG，而IgM一般情况下仅在感染后2—3个月存在于血清中，因此是近期感染的一个有效标志物。 再次，对与婴儿来说，因为出生前母体的IgG会被动的传递给了胎儿，所以对6个月以下的婴儿IgM检测是更为有用感染标志物。 * * 96.3% 100.0% 36 ELISA 副流感病毒 96.4% 100.0% 40 ELISA 乙型流感病毒 96.4% 94.1% 46 ELISA 甲型流感病毒 100.0% 93.8% 97 ELISA 呼吸道合胞病毒 97.0% 85.7% 74 ELISA 腺病毒 98.0% 100.0% 61 IFA 肺炎衣原体 97.6% 100.0% 74 IFA Q热立克次体 100.0% 96.8% 62 ELISA 肺炎支原体 98.4% 94.4% 82 IFA 嗜肺军团菌 阴性符合率 阳性符合率 样本数量 对比方法 病原体